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目的:通过实验,建立葛根芩连结肠定位片(GGQLJC,Gegenqinlian colonic localization tablet)HPLC指纹图谱及有效成分的含量测定方法,对主要色谱峰进行初步的药材归属,并对制剂抗家兔湿热内蕴型UC作用机制进行研究,为控制GGQLJC制剂质量和探讨其治疗湿热内蕴型UC机制提供理论依据。方法:1.采用高效液相色谱法,以 Agilent ZORBAXSB-C18(4.6X250mm,5μm)为色谱柱,以乙腈(B)-0.015mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱,检测波长:270nm;流速:1mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10μL。检测时间:120min。采用指纹图谱相似度软件(2012版)进行数据分析,建立GGQLJC HPLC指纹图谱,根据保留时间及相应色谱峰的色谱图对GGQLJC指纹图谱中的主要色谱峰进行初步的药材归属,同时对复方中的有效成分进行含量测定。2.采用高脂高糖饮食法造出家兔湿热内蕴型体质,结合三硝基苯磺酸(TNBS)法建立湿热内蕴型UC模型;将家兔分为7组,每组8只:正常组,模型组,GGQLJC高剂量组,GGQLJC中剂量组,GGQLJC低剂量组,阳性西药柳氮磺胺吡啶(SASP)组,传统葛根芩连片(GGQL)组;对家兔进行临床活动度观察,DAI评分,CMDI评分,TDI评分,测定结肠长度、脾脏指数、胸腺指数和结肠指数,采用ELISA方法检测血清及结肠组织中MPO和Th1/Th2细胞因子含量,采用免疫组化法观察结肠组织PPAR-γ和NF-kBp65蛋白表达变化,比较各组治疗效果,探讨GGQLJC治疗湿热内蕴型UC的药效学机制和免疫学机制。结果:1.通过方法学考察建立了 GGQLJC指纹图谱的定性定量检测方法,并对12批葛根芩连结肠定位片进行指纹图谱检测分析,共检测出35个共有峰,其中13个峰归属于葛根,13个峰归属于黄芩,6个峰归属于黄连,4个峰归属于廿草;12批制剂相似度均大于0.9,制剂生产工艺稳定可行。2.药效学实验研究表明,各治疗组能够有效缓解湿热内蕴型UC家兔的临床症状,降低DAI评分、CMDI评分、TDI评分,增加结肠长度、降低结肠和脾脏重量、增加胸腺的重量,降低MPO活性,降低家兔血清及结肠组织Th1细胞因子IL-1β和TNF-α并提高Th2细胞因子IL-4、IL-13的表达,上调结肠组织PPAR-γ蛋白表达,下调结肠组织NF-kBp65蛋白表达,与模型组比较差异显著(P<0.01),其中以GGQLJC高剂量组及SASP组作用效果更为显著。结论:建立的HPLC色谱方法能有效控制GGQLJC的质量,且GGQLJC可以改善湿热内蕴型UC的炎症反应,调节Th1/Th2细胞的平衡及PPAR-γ蛋白表达和NF-kBp65蛋白表达,其效果优于传统GGQL组,为传统中药复方口服结肠定位给药系统的研究奠定了一定的实验基础。