腐烂苹果中产果胶酶菌株的分离及产酶条件的优化

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本研究以腐烂苹果中分离筛选出的高产果胶酶菌株YL-9为出发菌株,对目标菌株的产酶条件进行了优化;通过(NH42SO4盐析、Cellulose DE-52阴离子交换柱层析、Sephadex G-100凝胶柱过滤,分离纯化获得了纯度较高的果胶酶,研究了果胶酶的酶学性质以及在苹果汁澄清方面的应用。取得以下研究结果:(1)本研究从腐烂的苹果中定向分离筛选出一株适合液态发酵法生产果胶酶的菌株YL-9,初步鉴定为扩展青霉。通过正交试验结果可知,扩展青霉YL-9产果胶酶的最佳培养基为:果胶0.7%,NaNO3 0.1%,MgSO4 0.02%,FeSO4 0.001%,KH2PO4 0.03%,豆粉1.0%,马铃薯20.0%;培养温度28℃,初始pH7.0,装液量50mL/250mL,接种量7%(v/v),培养时间48h。在此优化发酵条件下,酶活力可达8.52U/mL,比初始酶活力提高了4倍。(2)通过(NH42SO4分级盐析试验,可知当(NH42SO4饱和度为60%时,酶液得到了初步纯化。采用(NH42SO4盐析、Cellulose DE-52阴离子交换柱层析、SepHadex G-100凝胶过滤柱层析等步骤,使果胶酶得到了进一步纯化,纯化倍数和收率分别为10.3和12.2 %。纯化后酶液经SDS-PAGE电泳检验为一条带,目的条带清晰,且无明显杂带,说明所产果胶酶为单一酶组分,纯度达到电泳纯。样品袋白纸迁移距离与标准蛋白样品的相对迁移距离对照,得出其相对分子质量约为73.5KDa。(3)通过温度、pH和金属离子对果胶酶活性的影响试验可知,果胶酶作用的最适温度为50℃,温度在4℃-60℃范围内,酶活力相对稳定,且相对酶活能够保持在50%以上,60℃以后酶活力损失较大。该果胶酶的最适反应pH值为6.0,当pH在5.0-9.0范围内,酶活力相对稳定,且相对酶活能够保持在70%以上。金属离子对果胶酶活性也有一定的影响,其中Ca2+和Li+对果胶酶活力具有明显的促进作用,Ag+、Fe2+、Cu2+对果胶酶活力具有明显的抑制作用。(4)通过果胶酶对苹果汁处理的单因素试验研究表明,果胶酶的用量为0.3-0.7 mL/kg、温度为35℃-60℃、pH 4.0-6.0、处理时间在25min以上,果胶酶对苹果汁澄清处理的效果较好,苹果汁的透光率可达90%以上,且清汁中可溶性固形物含量基本变化不大。在此基础上,采用正交试验,得出果胶酶对苹果汁澄清处理的最适工艺条件为:果胶酶用量0.6 mL/kg、温度45℃、pH5.0、处理时间55min。
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