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糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)严重的并发症之一,也是一种常见的高致盲率眼病。据统计显示DR的患病率为25%左右,并且即使血糖控制良好,DR可能仍会继续发展,后期将严重影响视力,降低患者及其家人的生活质量。目前DR的发病机制具有多种学说,治疗方面也没有一个很好的办法,故寻找DR的病因并根据病因寻找出更好的治疗方法就成为人们的研究热点。国内的多数学者认为DR除了以往认为的视网膜微血管病变外还包括相应的神经退行性病变,细胞凋亡是后者发生的重要因素。细胞凋亡包括死亡受体途径、线粒体途径以及最近研究较为热门的内质网应激途径。葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)作为内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径中的标志性因子在细胞凋亡中发挥了重要作用。中医认为:“热、虚、瘀”是糖尿病病机关键,菩人丹(Purendan superfine powder,PRD)是以苦瓜为君药、辅以人参和丹参、再加制首乌、水蛭及葛根组成的中药复方,具有清热、化瘀、益气的功效。本研究采用雄性自发性2型糖尿病大鼠模型Otsuka Long-EvansTokushima Fatty(OLETF)大鼠,采用TUNEL、HE、免疫组化、PCR、Western boltting等实验方法探讨PRD对2型糖尿病大鼠视网膜上GRP78和CHOP的影响,来探讨PRD对DR视网膜神经组织损伤的干预作用,为临床可能应用PRD治疗糖尿病视网膜病变提供实验依据。目的:观察中药复方PRD对OLETF大鼠视网膜GRP78、CHOP的表达的影响,探讨PRD对糖尿病大鼠视网膜的干预作用。方法:(1)以雄性自发性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠和非糖尿病对照组LETO大鼠为实验对象,定期行口服葡萄糖耐量试验,以血糖峰值>16.7mmol·l-1和负荷后120min血糖>11.1mmol·l-1时为成模标准。至32周龄时造模成功时,随机选出24只成模的oletf大鼠并随机均分为糖尿病模型组、prd治疗组,同时选用同周龄12只雄性leto大鼠为正常对照组。prd治疗组采用给大鼠连续prd(1.8g.kg-1.d-1)灌胃2个月,其余两组予等体积蒸馏水灌胃2个月。(2)采用快速血糖仪法监测大鼠空腹血糖,并观察大鼠生存状况。(3)给药结束后取血后处死大鼠,取眼球进行处理。(4)苏木精-伊红(he)染色法观察oletf大鼠视网膜组织变化。(5)tunel法检测视网膜细胞凋亡结果(6)sp免疫组织化学染色法观察视网膜grp78、chop蛋白表达。(7)westernblotting法检测视网膜grp78、chop蛋白表达及定量分析。(8)rt-pcr法检测视网膜中grp78、chopmrna表达及定量分析。结果:各组大鼠生存状态的改变:糖尿病模型组大鼠毛发质量差、脱毛、受震动、声音等影响易暴躁,精神萎靡、不喜活动但体重减轻,多食、多饮、多尿等现象随着病程的进展而严重。prd治疗组大鼠接受prd灌胃治疗后,毛发较模型组大鼠有光泽,体重增加,饮水量及尿量均较模型组减少。正常对照组大鼠除体重增加外无明显变化。血糖监测结果显示:与糖尿病模型组大鼠相比,prd治疗组大鼠血糖水平明显降低,差别有统计学意义(p<0.01);与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠血糖水平明显升高,差别有统计学意义(p<0.01)。he染色法观察各组大鼠视网膜病理形态结构变化:正常组对照大鼠视网膜分层清晰且结构完整,神经节细胞排列整齐,内界膜表面光滑,无肿胀、增厚等改变。糖尿病模型组大鼠视网膜层次紊乱,神经节细胞数减少,核固缩,部分呈空泡样,部分内界膜肿胀、增厚甚至破裂,内界膜表面粗糙不平,增生的毛细血管内皮细胞突出于内界膜。prd治疗组大鼠视网膜分层较清楚,神经节细胞数稍减少,部分内界膜肿胀、增厚较模型组明显减轻。tunel法、免疫组化法结合westernblotting发现:与正常对照组相比,糖尿模型组大鼠视网膜组织ai、grp78、chop蛋白表达显著升高(p<0.01);与糖尿病模型组相比,prd治疗组大鼠视网膜组织AI、GRP78、CHOP蛋白表达显著降低。RT-PCR结果显示:与正常对照组相比,糖尿模型组大鼠视网膜组织GRP78、CHOPmRNA表达显著升高(P<0.01);与糖尿病模型组相比,PRD治疗组大鼠视网膜组织GRP78、CHOPmRNA表达显著降低。结论:PRD可通过下调GRP78和CHOP的表达,抑制内质网应激,减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,从而起到保护糖尿病视网膜神经组织的作用。