【摘 要】
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松茸(Tricholoma matsutake)是一种名贵的食用菌,它不仅具有丰富的营养价值,而且它的活性成分具有抗氧化,抗菌及抗病毒作用。以往大多数学者都是直接研究其活性成分,而对它的内生真菌的次生代谢产物研究较少。本论文主要采用两种不同培养方法对松茸内生真菌哈茨木霉Trichoderma harzianum进行次生代谢产物及其活性研究,为发现更多新颖活性化合物和创新药物提供了新的途径。论文内容
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松茸(Tricholoma matsutake)是一种名贵的食用菌,它不仅具有丰富的营养价值,而且它的活性成分具有抗氧化,抗菌及抗病毒作用。以往大多数学者都是直接研究其活性成分,而对它的内生真菌的次生代谢产物研究较少。本论文主要采用两种不同培养方法对松茸内生真菌哈茨木霉Trichoderma harzianum进行次生代谢产物及其活性研究,为发现更多新颖活性化合物和创新药物提供了新的途径。论文内容共分为四章:第一章综述了松茸的活性成分及木霉属真菌的次生代谢产物研究进展,为本课题提供研究思路。第二章主要是对150株松茸内生真菌进行化学多样性筛选,从中筛选出化学多样性丰富,代谢量大的菌株SM-6。通过形态学鉴定和ITS序列分析对菌株SM-6进行鉴定,从而鉴定为哈茨木霉Trichoderma harzianum。第三章采用PDB液体培养基对松茸内生真菌哈茨木霉Trichoderma harzianum进行次生代谢产物及生物活性研究,从中分离鉴定了8个化合物,包括4个新化合物:triharzianin B(1*)、triharzianin D(2*)、trichoharin A(5*)和triharzianin E(6*)。4个已知化合物5-hydroxy-3-hydroxymethyl-2-methyl-7-meth oxychromone(3)、5-hydroxy-2,3-dimethyl-7-methoxychromone(4)、ananstreps C(7)和ergos-terolperoxide(8)。对化合物1*-6*做了抗菌活性实验,实验结果表明:与制霉素(对Trichoderma sp.和Aspergillus fumigatus的MICs分别为:16和8μg/m L)相比,化合物4和5*对Trichoderma sp.有一定的抑制作用,MICs均为32μg/m L。化合物1、3、4和5*对Aspergillus fumigatus有一定的抑制作用,MICs值分别为:64,64,64和16μg/m L。化合物5*对乙酰胆碱酯酶有一定抑制活性,抑制率为29.31%。另外,测试了化合物1*-6*和土豆液体发酵液粗提物、土豆液体菌丝体粗提物对家蚕幼虫的诱食活性,结果显示:与诱食剂相比(诱食率50%),化合物2、3、5*、6*、哈茨木霉土豆液体发酵液粗提物、土豆液体菌丝体粗提物对家蚕幼虫有显著的诱食作用,诱食率在75%-92.9%之间。化合物5*、6*和溶剂空白均使幼蚕体重减轻,失重率分别为:-2.8%,-1.7%和-4.0%,三组幼蚕体重变化相差不大。第四章主要采用香菇:土豆(1:2)固体培养基对哈茨木霉Trichoderma harzianum进行次生代谢产物及其生物活性研究,从中分离鉴定了9个化合物,包括1个新化合物triharzin C(1*);8个已知化合物:10,11-dihydroxycyclonerodiol(2)、cycloerodiol(3)、dehydrovomifoliol(4)、15-hydroxyacorenone(1S,4S,5S)-8-hydroxymethyl-l-isopropyl-4-methylspiro[4.5]-dec-8-en-7-one(5)、15-hydroxy-trichoacorenol(6)、(3S,5 R,6S,7E,9R)-3,6-dihydroxy-5,6-dihydro-β-ionol(7)、harzianone A(8)和volemolide(9)。对化合物1*-8做了抗菌活性实验,结果表明:与制霉素(对Trichoderma sp.和Aspergillus fumigatus的MICs分别为:16和8μg/m L)相比,化合物1*对Trichoderma sp.具有明显的抑菌活性,MIC值2μg/m L。化合物4,6和8对Trichoderma sp.有一定的抑制作用,MICs值分别为:64、64和32μg/m L。化合物5、6和8对Aspergillus fumigatus有一定的抑制作用,MICs值分别为:32,16和32μg/m L。化合物8对家蚕幼虫有一定的诱食活性,诱食率为28.6%。与诱食剂(诱食率50%)相比,化合物1*-7以及香菇土豆发酵哈茨木霉粗提物、香菇土豆空白提取物、松茸空白提取物对家蚕幼虫有更好的诱食活性,诱食率在75%-92.3%之间。而化合物9和哈茨木霉松茸发酵粗提物对家蚕幼虫表现出拒食活性。化合物1*和9在喂养家蚕幼虫后,使家蚕幼虫体重下降,失重率分别为:-7.1%和-6.8%,溶剂空白组幼蚕体重失重率为-4.0%。
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