水稻OsRACK1的遗传转化与功能研究

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RACK1作为WD40蛋白超家族成员首先在动物中被发现,哺乳动物中RACK1是支架蛋白。作为高度保守的细胞内衔接蛋白,RACK1参与多条信号通路。在哺乳动物中RACK1除了与PKC结合外,在蛋白翻译、组织发育、昼夜节律、神经反射、肿瘤形成中发挥重要作用。在植物中,RACK1参与多种生长发育过程的调控,包括植物激素信号转导、叶和根的生长、干旱和盐胁迫反应、水淹逆境、种子萌发、H2O2的产生、先天免疫反应、植物对病原真菌反应、核糖体的联系、蛋白翻译和miRNA合成等过程,RACK1在模式植物拟南芥中被广泛研究,但由于RACK1的功能在不同的植物中存在差异及组织特异性,所以应当在不同的植物中继续对RACK1展开研究。在本研究中,我们克隆了水稻OsRACK1A和OsRACK1B基因,构建了带有荧光标签的转基因植株。主要结果如下:1.T1代获得了OsRACK1A-eGFP和OsRACK1B-eGFP过表达转基因水稻,通过Basta抗性筛选、western blot蛋白鉴定、实时荧光定量PCR鉴定以及激光共聚焦检测绿色荧光蛋白,证实已获得OsRACK1A-eGFP和OsRACK1B-eGFP过表达转基因水稻株系。并且通过激光共聚焦观察绿色荧光蛋白标签的亚细胞定位,证实OsRACK1A, OsRACK1B在整个细胞中均有分布。2.利用western blot对野生型水稻籽粒发育过程中OsRACK1A蛋白进行表达分析,结果表明,在水稻籽粒发育过程中OsRACK1A不断地积累,而且其积累量非常大,据此推测,OsRACK1A很有可能在籽粒的发育过程或者籽粒萌发过程中扮演着非常重要的角色。另外,本研究证明了籽粒发育过程中OsRACK1A与淀粉结构可能不存在直接联系。3. OsRACK1A干扰表达、过表达转基因株系以及野生型水稻抽穗时间存在差异,OsRACK1A干扰表达转基因株系先抽穗,其次是野生型对照,OsRACK1A过表达株系最后抽穗,干扰表达株系与过表达株系抽穗时间至少相差10天。此结果暗示,OsRACK1A可能在水稻抽穗过程中起负调控作用。4.在盐胁迫下水稻OsRACK1A的转录水平显著降低,但其蛋白表达量却增加,表型分析结果显示,OsRACK1A干扰表达的转基因株系的幼苗较野生型和过表达株系有较强的抗盐能力。综上所述,我们对水稻OsRACK1A在盐胁迫、籽粒发育以及抽穗期中的功能进行了研究。并为进一步研究水稻OsRACK1信号转导途径提供转基因材料。
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