三阴性乳腺癌（TNBC）是一种严重威胁女性健康的疾病,目前治疗手段以化疗为主,毒副作用大且患者易产生耐药性,临床迫切需要开发有效的靶向疗法。机制研究表明,激活转录因子AP-1在三阴性乳腺癌中高表达,开发以AP-1为靶点的抑制剂具有重要意义。课题组的前期研究工作中,发现藜芦胺及其类似物可特异性识别并结合AP-1靶基因序列,从而抑制下游多种与肿瘤形成、侵袭和转移相关的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用。本课题首先以藜芦胺为先导化合物对其展开结构修饰,通过分析先导化合物藜芦胺与AP-1靶向DNA序列的结合特点,从四个方面对藜芦胺衍生物进行结构设计:（1）将E环氮原子连接不同长度和不同类型的侧链;（2）将3位羟基氧化成羰基同时伴随双键移位,羰基通过亲核加成反应构建成具有氢键给体或受体的基团;（3）利用乙酰化条件保护3位羟基,氧化23位羟基构建关键中间体,进行氟取代等衍生物的合成;（4）将双键转化为环氧桥或邻位双羟基。共设计合成50个藜芦胺衍生物,所有中间体及目标化合物均通过HR-MS,¹H-NMR和¹³C-NMR确证结构。其次,本课题对合成得到的藜芦胺衍生物进行了初步机制验证和体外三阴性乳腺癌细胞增殖抑制活性测试。以HEK293为模型细胞,构建了HEK293/AP-1荧光素酶报告基因系统,分别在30μM和10μM条件下测定了藜芦胺衍生物对AP-1信号通路的抑制作用,共筛选出13个目标化合物对AP-1信号通路的抑制作用比先导化合物藜芦胺更强。同时,考虑到NF-κB信号通路对人体正常生理功能的调节具有重要作用,本课题利用构建的HEK293/NF-κB荧光素酶报告基因系统测试了目标化合物对NF-κB信号通路的抑制作用。结合藜芦胺衍生物在以上两种报告基因系统中的测试结果,课题组共优选出8个衍生物VT-18、VT-19、VT-22、VT-23、VT-27、VT-38、VT-39、VT-42在保持较强AP-1通路抑制活性的基础上对NF-κB通路无明显抑制作用。因此,本课题测试了8个优选藜芦胺衍生物对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制活性,结果显示,衍生物VT-38和VT-39显示出比先导化合物藜芦胺(IC₅₀=10.37μM)更优的体外增殖抑制活性,IC₅₀值分别为3.87和4.22μM。进一步机制研究表明,优选衍生物通过结合于靶DNA序列,有效抑制了AP-1/DNA复合物的形成,从而抑制了下游MMP-2和MMP-9的表达,发挥抗三阴性乳腺癌侵袭和转移的作用。最后,利用分子对接技术考察优选衍生物与DNA靶序列的结合模式,结果表明优选化合物与DNA碱基之间的氢键作用与先导化合物藜芦胺的结合模式相似,且23位羟基是重要的药效基团,提示我们在下一步的结构修饰中应以原形形式保留更有利于保持活性。综上所述,本课题以活性天然产物藜芦胺为先导化合物,经结构优化及生物活性测试研究获得了一系列对AP-1通路具有较强选择性抑制活性的藜芦胺衍生物,其中两个衍生物对三阴性乳腺癌细胞在体外测试中显示较强的细胞增殖抑制活性,值得进一步研究。本课题新型AP-1通路抑制剂的研究结果为新型抗三阴性乳腺癌药物的研发提供了新的先导化合物,同时也为抗肿瘤药物设计提供了新思路。