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背景:近年来国内外的多项研究报道人基质金属蛋白酶-7(Matrix metalloproteinase-7,MMP-7)在多种类型癌症及肿瘤细胞系中存在过表达现象,而在相应的正常组织中却不表达或低表达,这预示其较高的诊断价值。在血清学中也有部分报道,但对癌症患者血清中自身抗体的检测还未见报道。我们检测了食管癌,胃癌,乳腺癌,肺癌血清中MMP-7自身抗体的存在情况,以初步评估其诊断价值。并利用原核表达系统表达该蛋白,制备该蛋白的多克隆抗体,为后续研究打下基础。方法:提取食管癌组织中总RNA,根据GeneBank公开发表的MMP-7 cDNA序列设计引物,用PCR方法扩增开放阅读框架内492bp的DNA片段,并将该片段定向插入到原核表达载体pET-17b和pET-28b中,获得了两种重组表达质粒。将PCR、酶切鉴定及测序鉴定正确的重组质粒,转化入大肠杆菌E.coli Rosseta (DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE检测所表达的蛋白,对重组蛋白的表达条件进行优化,并对表达重组蛋白进行可溶性分析。在变性条件下利用Ni-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白。纯化的重组蛋白一部分用于制备小鼠多抗,另一部分直接包被酶标板,利用间接ELISA的方法对50例食管癌病人,38例胃癌病人,43例乳腺癌病人,及48例肺癌病人血清中MMP-7自身抗体进行检测,进而对检测方法的诊断价值进行评估。结果:获得492 bp MMP-7编码序列的DNA片段,并成功构建两种原核表达载体pET-17b-MMP-7和pET-28b-MMP-7,构建了MMP-7重组蛋白的表达系统pET-28b- MMP-7/Rosseta (DE3)。SDS-PAGE显示该重组表达菌能高效表达出18kDa左右的融合蛋白,分子质量大小与预期一致。通过改变IPTG的浓度,温度和诱导时间,确定了表达基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.4 mmo1/L,诱导时间为4h,诱导温度为37℃。经可溶性分析,目的蛋白以包涵体的形式存在。在变性条件下用Ni-NTA凝胶亲和层析法获得了高纯度的融合蛋白。免疫小鼠获得特异性较高的多克隆抗体。血清中MMP-7自身抗体在食管癌病人、胃癌病人和乳腺癌病人中的含量与正常组比较差异显著(P<0.01),而在肺癌中与正常组相比无显著差异(P>0.05)。结论:MMP-7融合基因可在大肠杆菌中获得高效表达,MMP-7自身抗体可作为诊断食管癌、胃癌及乳腺癌较为理想的标志物。