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采用手握法采集成年上海白猪精液,收集中段富含精子部分,配制不同的稀释液,在不同条件下进行冻前预处理,并采用不同的冷冻高度进行冷冻,再用不同的解冻方法进行解冻,然后进行体外授精和人工授精试验;同时,还对冷冻前后精液的超微结构进行了电镜观察。结果如下:1.在冷冻Ⅰ液中添加0.1%的N-AcGA(N-Acetyl-D-Glucosamine,N-乙酰-D-氨基葡萄糖),解冻后精子的活力和顶体完整率最高,分别为50.00%和56.60%;冷冻Ⅱ液中以4%的甘油浓度最好,解冻后精子的活力、质膜完整率和顶体完整率可分别达52.50%、52.08%和77.67%;冷冻液中添加终浓度为10%或20%的卵黄可有效保护精子的活力;在4℃中平衡2h,冻后顶体完整率比对照组(Oh)有显著提高(P＜0.05);分别选取卵黄(15%和20%)、甘油(1%和1.5%)和OEP(Orvus Es Paste,氨基-钠-十二烷基硫酸脂)(0.5%和1%)两个较好的浓度和平衡时间(0h和2h)相互配伍来进行猪精液冷冻,试验发现,在稀释液中添加15%的卵黄、1%的甘油和0.5%的OEP,平衡2h组可获得较好的活力(35%)和顶体完整率(56.38%);添加0-0.64mg/mL谷胱甘肽对精子的活力或顶体没有显著的改善。2.选取6个不同的冷冻高度分别冷冻猪5mL大管精液,检测冻后精子的活力、质膜完整性和顶体完整性,结果发现,1cm组冻后活力和顶体完整率最高,分别为55.00%和80.08%;解冻温度分42℃(30s、40s、50s)、52℃(18s、25s、35s、45s)和60℃(20s、30s、40s)共10个组别,试验结果表明,解冻温度和对应的解冻时间对冻后精子的活力影响不明显,顶体完整性却差异显著,以42℃40s组最佳,为59.50%,并在解冻15分钟后精子活力最高,都在0.4以上。3.本试验比较了颗粒、0.25mL细管和5mL大管三种剂型冷冻猪精液的效果,结果发现,5mL大管冻后活力(40%)、活率(49.58%)、质膜完整率(53.91%)和顶体完整率(52.65%)比0.25mL细管低,但差异不显著;采用5mL大管冻后精液和新鲜精液进行IVF试验,无论是在卵裂率,还是桑椹胚或囊胚率上均不存在显著差异(P＞0.05);本试验还利用颗粒和5mL大管冻后精液进行输精,发现受胎率相当。4。利用扫描电镜技术,研究5mL大管精液超低温冷冻前后猪精子的形态和超微结构,结果发现,冻后精子的顶体膜扣质膜肿胀,大都呈泡状化,部分局部断裂,表明超低温冷冻和升温解冻对猪精子的膜结构损伤严重。