肝细胞生长因子、降钙素基因相关肽对小儿鞘状突闭合影响的体内外研究

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目的:探讨肝细胞生长因子(Hepatocytegrowthfactor,HGF)、降钙素基因相关肽(Calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)与小儿腹股沟斜疝的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定60例不同年龄阶段男性腹股沟斜疝患儿(实验组1)和30例来院体检的健康小儿(对照组1)血清HGF、CGRP浓度;流式细胞技术检测实验组1患儿疝囊和30例需行开腹手术的非鞘状突疾病患儿(对照组2)腹膜上HGF受体c-met蛋白、CGRP受体密度;另取15例男性腹股沟斜疝患儿(实验组2)疝囊,将离体疝囊行组织培养,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定含有CGRP细胞培养基和不含CGRP细胞培养基中HGF浓度。结果:1、血清HGF、CGRP浓度的变化(1)对照组1中不同年龄阶段小儿血清HGF、CGRP水平无显著性差异(P>0.05);(2)小儿腹股沟斜疝患者血清HGF、CGRP浓度均低于对照组1(P<0.05),其中6月≤年龄<1岁组血清HGF、CGRP水平最低(P<0.05),1岁≤年龄<3岁组和3岁≤年龄≤6岁组血清HGF、CGRP水平无显著性差异(P>0.05)。2、实验组1和对照组2中HGF受体、CGRP受体在腹膜和疝囊上的表达(1)HGF受体在腹膜和疝囊上的表达:①HGF受体在腹膜间质细胞上低表达或不表达(5.21±2.18),而在疝囊间质细胞上高表达(52.23±53.48)(P<0.05);②HGF受体在腹膜和疝囊间皮细胞上的表达无显著性差异(P>0.05);③HGF受体在腹膜间质细胞上的表达(5.21±2.18)明显低于腹膜间皮细胞上的表达(20.77±11.13)(P<0.05),而其在疝囊间质细胞上的表达(52.23±53.48)高于疝囊间皮细胞上的表达(29.44±20.36)(P<0.05)。(2)CGRP受体在腹膜和疝囊上的表达:①CGRP受体在腹膜间质细胞上的表达(69.78±51.43)低于疝囊间质细胞上的表达(106.47±106.17)(P<0.05),而其在疝囊间质细胞上的表达以1岁≤年龄<3岁组最高(169.32±137.08)(P<0.05),6月≤年龄<1岁组和3岁≤年龄≤6组CGRP受体在间质细胞上的表达无显著性差异(P>0.05);②CGRP受体在疝囊间皮细胞上低表达或无表达(6.16±6.51),而在腹膜间皮细胞上表达(22.73±15.45)(P<0.05);③CGRP受体在腹膜间质细胞上的表达(69.78±51.43)高于腹膜间皮细胞上的表达(22.73±15.45)(P<0.05),而其在疝囊间质细胞上的表达(106.47±106.17)明显高于疝囊间皮细胞上的表达(6.16±6.51)(P<0.01)。(3)HGF受体、CGRP受体在单、双侧疝囊上的表达实验组1中HGF受体、CGRP受体在单、双侧疝囊的间质细胞及间皮细胞上的表达无显著性差异(P>0.05)。3、细胞培养基HGF浓度的变化(1)经培养0h,24h,48h后,含CGRP细胞培养基和无CGRP细胞培养基中HGF浓度均随培养时间的延长而增加(P<0.05);(2)对于在同一时间段而言,经培养24h后,两种培养基中HGF浓度无差异(P>0.05),而在培养48h后两种培养基中HGF浓度间存在差异(P<0.05),15例中有2例6月≤年龄<1岁的患儿的HGF在含CGRP细胞培养基中的浓度明显高于无CGRP细胞培养基中的浓度(24h:P<0.01,48h:P<0.01).结论:(1)6月≤年龄<1岁和1岁≤年龄<3岁年龄段可能是影响鞘状突闭合的关键时期。(2)外源性CGRP可能引起疝囊间质中HGF浓度的升高,暗示了内源性CGRP、HGF缺乏可能影响鞘状突的闭合。(3)鞘状突闭合因素的多样性及HGF、CGRP参与鞘状突闭合调控过程的复杂性。
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