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丹皮酚（Paeonol，Pae）又称牡丹酚，是毛莨科植物牡丹Paeonia Suffruicosa Andr.根皮和萝摩科植物长徐长卿Pycnostelma Paniculatum（Bunge）K．Schum干燥根或全草的主要有效成分。Pae是一种小分子的酚类化合物，呈白色针状结晶，具有熔点低（mp51℃±1℃）、易挥发及水溶性差的特性。其分子量（Mr）为166.18，分子式为C9H10O3，化学结构是2-羟基-4-甲氧基苯乙酮。有关Pae药理作用的研究可以追溯到1947年，当时学者报道牡丹皮水煎液在试管中能抑制伤寒杆菌的生长。此后，国内外诸多学者逐渐重视其药理学研究。研究结果表明，Pae具有镇静催眠、解热镇痛、抗菌消炎、免疫调节、抗氧化及保护心脑血管等广泛的药理活性。我们在前期研究中发现，Pae对体外培养的多种肿瘤细胞的增殖有较强的抑制作用。本文以体内、体外实验相结合，对Pae的抗肿瘤活性作了进一步的考察，并通过观察免疫指标、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的变化，探讨Pae的抗肿瘤作用机制，现分述如下： 1．Pae的体内和体外抗肿瘤作用 1．1 Pae的体外抗肿瘤作用 采用MTT法检测Pae对体外培养的肿瘤细胞的增殖抑制作用。Pae在7.81～250mg·L-1剂量下对体外培养的人红白血病细胞系K562、乳腺癌基因细胞系T6-17、肝癌细胞系BEL-7404及宫颈癌细胞系Hela的增殖均有抑制作用。药物浓度越高，抑制作用越强，有明显的剂量效应关系。对不同的细胞系抑制作用不同，安徽医科大学博士学位论文JU一eso值分别为:30.83一119吃.’（K562）、x3.44川g一J一‘（’l’。一，:）、69.89 1119·L‘’（BEL一7404）及93.91 mg·L‘’（llela）。以l，ael25 1119·l厂’及250，119·xJ一’分别作川J几以一上到}})J包，于24h、48h、72h及961:观察红!})j包I’I勺生长情况，发现Pae又寸红l})】包的J曾夕八JqJ制作川有明显的时间效应关系，作川时间越长，抑制作川越强。1，2 Pae的体内抗肿瘤作用 Pae灌胃给药川莫型小鼠HePA肿瘤的生长有明支谈抑;ljlJ作川。在50mg .kg一’心一’X 14d剂量下抑瘤率为40%左右，当剂量增至800mg·kg一’·d一‘X14d时抑瘤率.箭达70%左右。表明Pae具有良好的抗肿瘤作用。在总共二批试验158只小鼠中，死亡8只，其中50 mg·kg一，·d一，剂量组死亡l只，200和400 mg·kg‘’·d一，剂量组各死一亡2只，800 mg·kg一’·d一’剂量组死亡3只。各剂量组小鼠死亡率均低于20%，用药后小鼠体重均有增加，未见明显毒副作用，表明Pae在本实验条件下具有良好的安全性。2.Pae对荷瘤小鼠免疫功能的影响2.1 pae对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应的影响 采用3H一护fdR掺入法测定淋巴细胞增殖反应。接种1 4d的模型小鼠脾淋巴细胞ConA及LPS诱导的增殖反应均减低，与正常对照组比较差异均有显著性。Pae在50、200 mg·kg一!·d一1 X 14d剂量下对conA诱导的增殖反应有增强作)}J;而在800mg·kg一’·d一!X 14d剂里下，conA诱导的增殖反应有一};降趋势。在50，200，800mg·kg一’·d’‘x14d剂量下对荷瘤小鼠LPs诱导的增殖反应均有抑制作用。结果提示，Pae对荷瘤小鼠的B淋巴细胞功能有抑制作用，但在一定剂量下可增强T淋巴细胞功能。2.2 Pae对IL一2生成的影响 采月」ltlA法检测IL一2含量，模型红L小鼠Jfl!.拿!‘示!L一2含员及肿细胞产生IL一2均低于一眨常对‘1狱组，l，ae在50，200，800，119·kg一’·d一’x 1 4d剂量’一}‘均不，J‘使模型小鼠脾细胞产生IL一2能力恢复至正常对1以组水平;在上述剂量一};Pae亦可使模型小鼠安徽医科大学博士学位论文血.清IL一2含量升高，其『1， 200、800mg·kg一’·d一’火14tlfrlJ员下与模型对!!砚纠比较差异有显著性。 体外试验中，Pae在6.25，12.5，25及50mg·L一’浓度卜川莫型小鼠脾细胞生成lL一2均有促进作川，其，}，在12.5和25 mg·L’‘浓2交卜诱生作川址强，具有统计学差异（p<0.05）。2.3 Pae对下N卜。生成的影响 TNF一u含最测定采川l{IA法。模型组小鼠l州青『rNF一。水平及PM中产生rrNF-。与正常对·1以红1比较无统不I学差异。I，ae在50，200，800:119·kg均，IJ‘使模型组小鼠!f一1.护!，了1’NF一。含量)1·高，l〕M中)c，二生‘l’Nl了一u一’·d一!x 14d剂量能力增强。体外试验，}，，l):，e了J56，3.]3，6.25，一2.5及25，119·l了一’浓度一J‘又寸模型小鼠l，M。卜生)戊1’NF一u具丫J‘统乙}·学j，’均有促进作用，其，}“在6.25及12.5 mg·L一’浓度下促进作用最强，异。 以「结果提示，!’:Le的抗月中瘤作川可能与增强细胞免疫功能，促进比一2及‘fNI了-u的生成有关。3.Pae诱导肿瘤细胞凋亡3.1 Pae诱导肿瘤细胞凋亡的形态学观察 HE染色光镜及电子显微镜下均可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。光镜下，凋l’:细胞体积缩小，核染色质浓缩深染，胞质深嗜伊红染，!阿坏死细胞形态不规则，胞质淡染，细胞膜溶解不完整，核查.戈碎片状。电镜下，.让见体积缩小的凋亡细胞，染色质浓缩致密，并沿核膜分布形成新月状体，凋亡晚期细胞，可见细胞分解为1哎包裹的凋亡小体。3.2 Pae?