自2010年10月起，猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）在中国严重暴发流行。为了解该病暴发的原因，对2010～2012年12株猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV）华中地区流行毒株S基因进行克隆、测序及遗传进化分析。利用原核表达的PEDV河南流行毒株N基因蛋白建立了用于检测PEDV抗体的间接ELISA方法，为猪群PED疫情防控提供工具。另外，为控制此次PED疫情，研究制备PE D卵黄抗体并应用于临床，取得较好防控效果。1.2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析自2010年底开始，PED在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因，对2010年10月至2012年6月收集于华中地区11个地市的12株PEDV流行毒株S基因进行RT-PCR扩增、克隆及测序，并对其序列变化、遗传进化关系、抗原位点、糖基化位点和多肽极性进行分析。结果显示，12株PEDV流行毒株S基因部分核苷酸及氨基酸的改变使其关键序列明显不同于以往毒株，其中有11株流行毒株的S基因比现用疫苗毒株CV777多9个核苷酸，而且在其S1区N′端存在大量的氨基酸突变。遗传进化分析显示，12株PEDV华中地区毒株与2007～2009年韩国毒株、2007～2008年泰国毒株、2009～2010年越南毒株、2011年日本毒株及2010～2012年中国其它地区流行毒株亲缘关系均较密切，而与欧洲株（CV777、Br1/87）、中国现用疫苗株（CV777）及2003～2007年中国分离株（LJB/03、JS-2004-2、DX、QH、LZC）亲缘关系均较远。与现用疫苗株（CV777）相比，流行毒株S蛋白的抗原位点、糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变，提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势。2.PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列，根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果，将N基因上两个大的抗原表位区（112～321位氨基酸）克隆至原核表达载体pET-32a，构建pET-32a-N重组质粒并转化至宿主菌BL2（1DE3）中。将重组菌在37℃的条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达，表达产物为融合蛋白，分子量约41.3kD。Western-blotting分析表明，所表达的蛋白可与PED小鼠阳性血清发生反应。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法，抗原最佳包被量0.226μg/孔，血清最佳稀释度为1:100，二抗最佳稀释度为1:2000，待检血清OD450值≥0.28判定为阳性。国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测，母猪血清PED抗体阳性率为84.26%（166/197），仔猪血清阳性率为27.93%（31/111）。结果表明所建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好，可用于临床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查。3.猪流行性腹泻高免卵黄的制备及临床应用针对病毒变异、现有疫苗预防效果不佳等状况，为有效控制疫情的发生和流行，利用流行毒株制备了PED高免卵黄抗体，并对其防治效果进行了研究。以流行毒株制备PED灭活苗免疫产蛋母鸡，当卵黄抗体的琼扩效价达到1:128时收集鸡蛋制备PED高免卵黄液，通过人工感染治疗试验和临床治疗试验观察其效果。人工感染治疗试验结果表明，治疗组仔猪的死亡率为10%（1/10），而对照组死亡率高达100%；临床治疗试验结果表明，对不同地市5家规模化猪场1343头猪的治疗有效率为90%，预防有效率为91%。结果表明所制备的高免卵黄抗体对PED具有显著的防治效果。