犬干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统的建立

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干扰素(IFN)是细胞分泌的小肽,具有抗病毒,抗增生和免疫调节等广泛的生物学活性。文献报道,已经研究过的所有哺乳动物,全部具有IFN基因。同时,IFN-β和IFN-γ具有种属特异性,而IFN-α表现出在异种动物细胞的抗病毒活性。正常细胞一般不自发产生IFN,基因处于被抑制状态。在有诱发剂的条件下,IFN基因解除抑制而获得表达。胸腺肽(THY)的主要活性成分是THY-α1,由胸腺细胞和淋巴细胞分泌。在不同种属间高度保守,主要作为免疫调节剂使用。干扰素(IFN)和胸腺肽(THY)联合使用在抑制病毒复制和免疫调节方面远大于各自单独使用效果。本实验依据IFN-α1和THY-α1的分子结构特征及大肠杆菌密码子的偏爱性设计引物,采用PCR方法获得二者的融合基因。将该基因克隆至pGEX4T-2原核表达载体中,构建了pGEX4T-IFNα1-THYα1原核表达质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)受体菌中,经IPTG诱导、表达、纯化获得IFNα1-THYα1融合蛋白。通过细胞病变抑制实验和E玫瑰花环形成实验对蛋白进行生物活性检测,结果表明IFNα1-THYα1融合蛋白具有双重生物活性。
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