目的：对比磷-31磁共振波谱(³¹P-MRS)与高效液相色谱（HPLC）在犬顿抑心肌能量代谢研究中的应用价值；动态观察顿抑心肌能量代谢、pH值的变化规律及与心肌超微结构改变等的关系；探讨顿抑心肌的发生机理及转归过程，建立动态观测局部心肌能量代谢改变的影像方法；为临床评估心肌能量代谢、及时的心肌保护治疗和预后随访提供客观准确无创的影像学诊断依据。 方法：选用14～17Kg的健康杂种犬18条作为实验对象。麻醉开胸，建立一次持续阻断左冠脉前降支（LAD）15min后解除阻断予以再灌注的顿抑心肌动物模型，采用HPLC法观察心肌缺血15min及再灌注后2h、6h、2d、3d心肌组织高能磷酸化合物的变化，并与再灌注后相应时间点同一部位³¹p-MRS改变进行分析比较。运用基础物理化学分析方法获得离体心肌能量代谢物含量绝对值，探讨其与在体顿抑心肌³¹p-MRS所显示的能量代谢变化的关系，以判断心肌存活情况。运用光镜及电镜检查，观察心肌缺血及再灌注后细胞与组织学改变，以探讨³¹P-MRS和HPLC所观察的局部能量代谢和组织学变化的关系。 结果： 1．犬顿抑心肌HPLC结果显示：缺血15min时，心肌组织中的磷酸肌酸（PCr）含量明显降低，三磷酸腺苷（ATP）含量有所减少，但尚维持在相对较高水平（p＜0．05），二磷酸腺苷（ADP）与一磷酸腺苷（AMP）含量升高（p＜0．05），腺苷酸总量（TAN=ATP+ADP+AMP）和能荷（EC=1/2ADP+ATP/TAN）下降（p＜0．05），缺血15min再灌注后2h，PCr、ATP、TAN与EC各值上升（p＜0．05），ADP与AMP含量下降（p＜0．05），再灌注后6h时PCr值已接近正常，之后无明显变化，而ATP、TAN与EC的回升较PCr明显缓慢，直到再灌注后第3d尚未恢复到正常水平（p＜0．05）。 2．犬顿抑心肌³¹P-MRS研究结果显示：急性心肌缺血15min再灌注后2h，PCr、β-ATP、PCr/βp-ATP和pH值下降（p＜0．05），Pi、Pi/PCr与Pi/β-ATP 第四军医大学硕士学位论文 比值升高…功刀引。PCr和 Pi／PCr比值在再灌注后 6h接近正常，之后无明显 改变。PCr旧－ATP和出值在再灌注6h开始上升，Pi与n雌－ATP比值开始 下降，持续到再灌注后第3d接近正常水平。 3．犬缺血再灌注后相应时间点同一部位心肌 3‘PMRS及 HPLC同步坝u定 的结果表明两种方法变化趋势的相关性好，基本无差别一＞0刀5人两种技术 检测结果均显示：再灌注后Zh，P＊r、AT P和P＊／AT P比值均下降，再灌注 6h PCr．f P比值上升达最高峰，再灌注后第3d仍稍高于正常水平，再灌注6h PCr含量己回升并超过正常水平，而ATP含量直到再灌注后第3d仍低于正常 水平。 4．犬顿抑心肌光镜下显示：心肌纤维略显肿胀变宽，横纹模糊不清，染 色变淡，再灌注后心肌纤维的横纹隐约可见。电镜下显示：肌原纤维明显松弛， 横纹模糊不清，染色质轻度靠边浓集，心肌细胞内水肿，线粒体略显肿胀，幡 紊乱、模糊不清或减少，基质变淡，基质颗粒与糖原颗粒减少，肌浆网轻度扩 张，而无间质水肿。再灌注后则显示受损伤的心肌细胞几乎无法与正常对照组 区别开来，偶见线粒体肿胀。所观察到的各个阶段，心肌细胞膜均完好无损。 结论： 1．犬缺血 15min时离体 HPLC法显示：PCr、ATP、TAN与 EC下降，但 在再灌注6h各值有所口升，尤其PCr己接近正常，说明PCr含量变化在短暂 缺血及再灌注时较ATP更敏感，TN和EC水平亦是描述细胞代谢的重要参 数，其测定值也是评价缺血心肌损害程度和心肌保护效果的重要指标。 2．犬顿抑心肌在体 3‘P－MRS研究显示：再灌注 6h后刊巾．ATP的变化较 PCr小ATP、Pir PCr和pH值的变化显著，表明在心肌缺血再灌注6h后测定 PU D－ATP比值的变化较 PCr／ p－Ah和 PU PCr的敏感性高，意义大。应该将 此作为一项主要观察指标，而不只是在传统的 PCr／ p－ATP与 Pi／PCr比值上。 3．将缺血再灌注后相应时间点同一部位心肌 HPLC与 3’P．MRS两种技术 测得的结果进行比较，无显著差别，即证明‘’P．MRS在测定活体心肌能量代谢 方面具有可靠敏感性，为 3乍．MRS判断存活心肌的准确性提供了依据。 ．4． 第四军医大学硕士学位论文 斗．无论是在局部缺血15m山时，还是在再灌注后的各个时间段，心肌细胞膜均完好无损，证明细胞膜的完整性是心肌缺血后局部细胞能否存活的首要条件。 总之，能量代谢变化是判断心肌存活的可靠指标。HPLC技术不失为动态观察顿抑。O肌发生、发展以及转归过程的一个较理想的方法。3’p．MRS在评估心脏冠状动脉血流重建后心肌活力、心肌再灌注效果和心肌功能的恢复等方面具有很大?