薄壳山核桃花粉萌发特性与差异蛋白研究

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薄壳山核桃是一种原产于墨西哥北部和美国南部的落叶乔木,其果实和树体的利用价值颇高,目前受到广大消费者和种植户的好评。本文以4个不同品种薄壳山核桃花粉为试验材料,研究内容包括4个品种薄壳山核桃花粉萌发和花粉管的生长、花粉贮藏特性及贮藏过程中生理生化变化、花粉萌发前后差异表达蛋白分析。主要结论如下:1.离体条件下花粉萌发和花粉管生长受到多种因素影响。薄壳山核桃花粉适宜的培养时间为24h,适宜的培养温度为25~30℃,温度过高或者过低均会抑制花粉萌发和花粉管生长。pH值、蔗糖浓度、硼酸浓度和PEG-4000浓度都在一定范围内对花粉萌发和花粉管生长起促进作用,而超过一定值后起抑制作用。适宜的培养基组分为:pH值5.5,蔗糖浓度为20~25%,硼酸浓度为0.03%,PEG-4000浓度为15%。2.不同贮藏温度和贮藏时间对花粉活力有较大影响,总体上表现为,随着贮藏时间的延长,贮藏温度越低,花粉生活力变化就越小。常温条件下花粉活力很容易丧失,不适合花粉贮藏,4℃贮藏条件可应用于收集雄花早散品种的花粉贮藏,为雌花晚开的雌花品种进行人工辅助授粉,-20℃贮藏条件应该可以用于保存翌年人工辅助授粉所需花粉。-70℃贮藏条件下花粉活力贮藏效果最好,适合用于花粉种质资源的保存。3.在4种贮藏温度下,随着贮藏时间的延长,各项生理生化指标表现出显著差异,与常温和4℃贮藏条件相比,-20℃和-70℃贮藏条件下抑制了花粉中MDA的积累,增强了SOD和POD的活性,减轻了花粉膜质过氧化和膜系统受伤害程度,同时提高了花粉可溶性蛋白质和可溶性糖的含量,增强了花粉的抗冻能力,从而使低温保存的花粉活力维持在相对较高水平。4.探索了适合双向电泳过程的重要环节,采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法提取蛋白质,结合使用pH4-7的IPG胶条,上样量为1500μg。不同品种薄壳山核桃花粉双向电泳图谱匹配度高于70%,特异表达的蛋白点数量分别为波尼3个、马汉9个、斯图尔特10个、‘钟山25’3个,蛋白点数量的差异可能与花粉萌发率差异相关。薄壳山核桃花粉萌发后检测到新出现16个蛋白质点,4个蛋白质点消失,还有3个蛋白质点的表达量上调。花粉萌发前后蛋白质表达谱的差异并不明显。因此,可以推测成熟花粉利用储藏的蛋白质完成萌发和花粉管的生长。
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