清络通痹颗粒对类风湿关节炎骨质破坏的干预作用及其机制研究

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清络通痹颗粒(OLT)对类风湿关节炎(RA)具有治疗作用。而骨质破坏是RA的重要病理环节,本文着重研究了OLT对这一环节的干预作用,并对其机制进行初步探讨。研究内容分为三个部分:第一部分研究清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠骨质破坏的影响。(1)制备大鼠胶原性关节炎(CIA)模型,造模7天后开始给药,连续给药42天。于末次给药后X线摄片观察各组大鼠关节骨质破坏情况;(2)观察各组大鼠滑膜细胞培养上清和QLT含药血清分别对体外培养的兔正常软骨细胞增殖反应的影响,及对软骨细胞培养上清中总蛋白(TP)、一氧化氮(NO)含量及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。结果:QLT3.6,7.2,14.4g/kg剂量可明显抑制CIA大鼠的病理组织学改变,对CIA大鼠后肢关节的骨密度降低,关节腔间隙增宽以及关节结构破坏等均有改善作用;QLT7.2,14.4g/kg剂量给药的CIA大鼠滑膜细胞培养上清可增强软骨细胞的增殖能力,明显增加总蛋白合成,降低iNOS的表达和NO含量。以14.4g/kg剂量给药的大鼠含药血清对软骨细胞的增殖能力有明显增强作用,能增加总蛋白合成,但对iNOS的表达和NO含量无明显作用。以上结果说明,QLT对胶原性关节炎模型大鼠的骨质破坏有保护作用,这种保护作用可能与其促进软骨增生,抑制滑膜细胞产生炎症因子有一定关系。第二部分研究QLT含药血清对成骨细胞和破骨细胞生长的影响。(1)体外培养乳鼠颅骨成骨细胞,观察QLT含药血清对体外培养的乳鼠正常成骨细胞的增殖反应及其培养上清中碱性磷酸酶(AKP)含量的影响。(2)体外培养乳鼠四肢长骨破骨细胞,观察QLT含药血清对体外培养的乳鼠正常破骨细胞的生长的影响。结果:QLT以7.2,14.4g/kg给药的大鼠含药血清对成骨细胞的增殖能力有明显增强作用,能明显增加AKP活性;QLT以3.6,7.2,14.4g/kg给药的大鼠含药血清对破骨细胞均有明显的抑制作用。以上结果说明,QLT体外给药能促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞生长,从而对破骨细胞功能活化、成骨细胞功能减弱所造成的骨密度降低有保护作用,这种保护作用可能与其促进成骨细胞增殖、增加其AKP活性,抑制破骨细胞生长,调节成骨-破骨细胞动态平衡有一定关系。第三部分研究QLT含药血清对体外培养的RA患者外周血淋巴细胞表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。取RA患者或正常健康志愿者全血,加入鼠抗人CD3-FITC和RANKL-PE,用FACS Calibur流式细胞仪检测,Cell quest软件分析,观察健康人和活动期RA患者外周血淋巴细胞表达RANKL的差异。并观察QLT含药血清对体外培养的RA患者外周血淋巴细胞表达RANKL的影响。结果:活动期RA患者RANKL的表达水平明显高于健康人;兔14.4g/kg剂量给药的QLT含药血清可明显抑制体外PHA刺激培养的RA患者外周血中T淋巴细胞RANKL的表达。以上结果说明,QLT可通过抑制外周血中淋巴细胞RANKL的表达,从而可能阻止破骨细胞的分化、成熟,对RA的骨质破坏有一定的治疗作用。结论:OLT对RA的骨质破坏有保护作用,这可能与其调节RA炎症和随后骨质破坏有关的成骨-破骨细胞功能失衡有关,同时也与抑制外周血淋巴细胞高表达的RANKL有关。
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