高效液相色谱法测定婴幼儿乳制品中免疫球蛋白IgG的含量

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运用高效液相色谱法进行免疫球蛋白IgG含量检测时,对相关待检品进行样品前处理实验条件优化以及色谱条件优化,能够提高检测的效率以及实际效果。本课题建立一种准确测定婴幼儿乳制品中免疫球蛋白IgG含量的方法。针对前处理方法及高效液相色谱条件进行实验研究。对样品前处理所用的提取溶剂、离心速率、超声时间、样品稀释倍数、调pH所用酸及检测波长、色谱柱、流速、柱温、流动相的pH分别进行了讨论,采用保留时间定性,峰面积外标法定量。实验确定最佳前处理条件:用8倍于样品的结合液A溶解样品,在4℃和8000r/min下离心,10%的磷酸调pH=4.6,超声20-30min;最佳色谱条件:选用Hi-TrapproteinGHP色谱柱,以0.05mol/LpH6.7磷酸盐缓冲液为结合液,0.05mol/mLpH2.7甘氨酸盐缓冲液为洗脱液,检测波长为280nm,流速0.4mL/min,柱温25℃。此法检出限为0.7μg/mL,平均回收率为92.16%,标准偏差为3.34%,IgG浓度在0.1-1.0mg/mL范围内与其目标峰面积呈良好的线性关系:y=2519x-24.71(R~2=0.9992)。并用该方法对实际样品中IgG含量进行分析,所得结果为:211.4、176.2、137.8、331.1mg/kg。
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