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本文对益母草抗冠心病心肌缺血有效部位进行筛选,确定有效部位为总生物碱和总黄酮。采用阳离子交换树脂法、聚酰胺—树脂结合法分别对总生物碱和总黄酮进行富集纯化工艺研究。并建立了总黄酮柱层析—分光光度法、盐酸水苏碱HPLC分析法以及总生物碱雷氏盐剩余比色法对益母草药材及有效部位质量标准进行初步研究。
抗Iso造成的大鼠心肌缺血药效研究表明,益母草总生物碱、总黄酮均具有抗心肌缺血作用,是益母草抗心肌缺血的活性组分,两者联合用药比单独用药效果更明显。益母草总生物碱富集纯化优选结果为:采用001×7阳离子交换树脂,湿法装柱,使径高比为1∶3,上样浓度1g生药/ml,上样药液以浓盐酸调pH值至1,以去离子水洗至洗脱液近无色,再以2mol几氨水洗脱,流出液pH8时开始收集,至少收集10倍柱体积。总生物碱纯度可达90%,转移率为60%。益母草总黄酮富集优选工艺为:采用D101树脂,湿法装柱,使径高比为1∶7。取相当于1/3湿树脂重量的药材提取液,蒸干后,加少量95%乙醇拌合入干燥的聚酰胺粉末,挥去溶剂。将拌合后干燥的聚酰胺粉,水洗至流出液为无色,取出,上铺于大孔吸附树脂柱,以50%乙醇洗脱,收集醇洗脱液7倍柱体积。总黄酮纯度可达23%,转移率为70%。对不同地区益母草药材中总黄酮含量进行测定,以黑龙江产最高,为0.327%,广西产最低,为0.07%。
结论:益母草总生物碱、总黄酮是益母草抗心肌缺血的有效部位,经富集纯化,总生物碱纯度符合五类新药有效部位的标准,总黄酮因其在益母草药材中含量较低,纯度虽提高200倍,但仍未达到有效部位要求。实验初步建立了药材及中间体质量标准,为开发具有独立知识产权抗冠心病心肌缺血新药提供了依据。