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研究背景：
恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)是淋巴结及其他器官中的淋巴组织恶性肿瘤，是造血系统常见恶性疾病之一，分为霍奇金病(Hodgkinsdisease，HD)及非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinslymphoma，NHL)两大类。在我国常见恶性肿瘤中占第8位，每年发病2～4/10万人口。目前，T细胞来源的非霍奇金淋巴瘤(NHL)化疗效果较B细胞来源的NHL差，预后不良，特别是复发难治T细胞NHL预后凶险。挽救方案均有一定的疗效，有效率在30﹪～50﹪，缓解时间较短，长期缓解约为10﹪，自体造血干细胞支持下的超大剂量化疗，能够明显提高远期疗效，但仍有相当部分复发NHL死于本病。因此，临床上仍需寻找新的药物以期能进一步改善NHL患者预后。
三氧化二砷在20世纪中后期治疗急性早幼粒细胞白血病取得了满意的效果，随着对砷剂了解的逐步加深，国内外学者已不仅局限应用As<,2>O<,3>治疗急性早幼粒细胞白血病，不少学者正在试用于恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等恶性血液病及肝癌等实体肿瘤，基础研究及临床研究均显示出诱人的应用前景。国内外基础研究显示As<,2>O<,3>体外单药、联合其他药物及方法如放疗等均可以抑制多种恶性淋巴瘤细胞株的增殖。临床方面，单药As<,2>O<,3>治疗复发难治性恶性淋巴瘤有效率约在21.4﹪～75﹪之间，大多数报道临床不良反应轻。所以，不少报道认为As<,2>O<,3>是值得在复发耐药NHL深入研究的药物之一。国内外多篇As<,2>O<,3>有关人体内药代动力学研究显示目前常规剂量给药后3-4h达药物峰浓度，在人体内代谢呈二房室模型特征，其代谢产物清除主要通过尿液，并且清除迅速，仅在部分组织内蓄积，无明显血液蓄积作用，可应用于严重肾功能不良的患者。当前临床常规用药多采用单次多天方式，即0.1～0.2mg/kg，连续治疗14天左右。根据国内外临床使用本药物经验，严重副反应报道少见，多表现为肝功能轻度异常，Q-T间期延长及轻度消化道反应等，安全性较佳。因此，按照药代动力学特点及目前临床不良反应情况，结合当前每天较低剂量较长时间的给予As<,2>O<,3>的问题，故考虑是否可以改变目前给药方式，探讨加大每天剂量，缩短整体治疗时间的可行性。
目的：
本文基于国内外众多学者在As<,2>O<,3>在治疗恶性淋巴瘤的临床及基础学研究结论，试图通过动物体内外实验，改变常规As<,2>O<,3>给药方式探讨相同总治疗剂量下．As<,2>O<,3>不同给药方式治疗淋巴瘤的可行性及相关不良反应研究。本文主要目的通过Annexin V/PI双染色法、流式细胞仪及MTT法检测三氧化二砷对鼠源性T细胞淋巴瘤EL4细胞株的体外抑制作用，验证体内实验可行性。进一步建立裸鼠T细胞淋巴瘤动物模型，采用不同给药方式研究三氧化二砷对动物体内T细胞淋巴瘤抗瘤作用，着重观察As<,2>O<,3>对肿瘤抑瘤率和了耐受性等。初步了解As<,2>O<,3>新的给药方法对T细胞淋巴瘤疗效及不良反应的变化情况。为临床更合理应用As<,2>O<,3>提供新的科学依据。
1．As<,2>O<,3>对T细胞淋巴瘤株EL4的体外实验研究
通过MTT法检测8种浓度的三氧化二砷对鼠源性T细胞淋巴瘤EL4细胞株的作用，在Spectra Max M2酶标仪上以试验波长570nm，参比波长450nm测定光密度值(OD值)，按照公式：抑制率(﹪)=[(OD阴性孔．OD给药孔)/OD阴性孔]×100﹪测定三氧化二砷对EL4细胞株抑率。流式细胞仪分析、Annexin-V-FITC/PI双标记及电镜检测细胞凋亡比例及凋亡形态变化。结果显示：各浓度组的As<,2>O<,3>对T细胞淋巴瘤EL4细胞均存在直接抑制作用，并呈时间及剂量依赖性。流式细胞分析各浓度均对EL4细胞有一定抑制作用，随着浓度的增大，凋亡细胞数量逐渐增多。荧光显微镜观察到肿瘤细胞凋亡形态。电镜下出现典型细胞凋亡小体。
2．As<,2>O<,3>对T细胞淋巴瘤荷瘤裸鼠移植瘤生长作用的实验研究
建立T细胞淋巴瘤EL4细胞荷瘤裸鼠移植瘤模型，随机分组为实验组和对照组，具体分组如下：A14组：As<,2>O<,3> 4mg/kg，dl-7，停药观察至d14；A7组：As<,2>O<,3> 4mg/kg，dl-7；B14组：As<,2>O<,3> 2mg/kg，dl-14；对照组：生理盐水，dl-14，腹腔注射。检测肿瘤体积变化和瘤重，计算抑瘤率，光镜下观察肿瘤组织病理学改变，并行组织学观察肝脏病理变化。实验结果为，实验组较对照组肿瘤生长速度减慢，各实验组抑瘤率分别为：A7组77.9﹪，A14组58.8﹪，B14组55.6﹪。A14组较B14组疗效稍好，但差异无统计学意义，故认为4mg/kg×7天组与2mg/kg×14天组疗效相当。药物不良反应方面：实验组A7 2只裸鼠及A14组1只裸鼠出现体重下降现象，其中A7组1只裸鼠24小时体重下降超过1g，并于实验第6日死亡，另外A14组1只裸鼠于实验第10日死亡，另外1只裸鼠在停药后体重逐渐增长。各实验组分别在给药结束后1天检测血常规，A7组全部裸鼠白细胞较A14、B14组明显下降，A7组1只裸鼠血小板下降明显。根据临床前动物实验剂量，推测人体临床试验单次使用参考剂量应小于30mg/d。
结论：
1．As<,2>O<,3>体外实验表明可抑制T细胞淋巴瘤EL4细胞株生长。
2．流式细胞仪分析及Annexin-v-FITC和PI双标记检测表明As<,2>O<,3>主要作用机制为诱导肿瘤细胞凋亡。
3．动物实验体内实验表明As<,2>O<,3>相同总剂量下，4mg/kg×7天与2mg/kg×14天的给药方式疗效近似。
4．动物体内实验表明As<,2>O<,3>存在一定骨髓毒性，但较轻，一过性，不良反应易耐受。但4mg/kg×7天的给药方式肝细胞损害较常规给药组严重。
5．较少给药天数增加单次给药的方式可作为以后As<,2>O<,3>治疗晚期复发耐药/难治淋巴瘤临床研究的参考应用模式，并需进一步作人体药代动力学和大规模的临床试验。