人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus, RSV)是造成世界范围内婴幼儿下呼吸道病毒性感染最重要的病原。呼吸道合胞病毒融合蛋白(fusion protein, F)为病毒表面结构蛋白,在RSV A, B两种亚型中有很高的抗原保守性,是主要的保护性抗原,诱导中和抗体,被认为是很有潜力的候选疫苗。纯化RSV的F蛋白对诊断试剂和亚单位疫苗的研制具有重要意义。目前文献报道的F蛋白的纯化方法大多为免疫亲和层析和蛋白电泳法,这些方法不但蛋白产量少且会导致其抗原性的部分丧失,因此,为获得产率高、抗原性好的纯化的F蛋白,本论文提出了一种两步层析纯化RSV病毒包膜F蛋白的新方法并建立了F蛋白的夹心ELISA定量检测方法。由HEp-2细胞培养的RSV纯化天然的F蛋白,首先以RSV感染HEp-2细胞,待细胞出现病变(cytopathic effect, CPE)后,收获细胞及培养液,离心,取上清,PEG6000沉淀,获得的沉淀物经溶解后通过蔗糖密度梯度离心进一步纯化,纯化的病毒用含Triton X-100的裂解液溶解包膜蛋白,病毒蛋白粗提液依次经过离子交换层析和凝胶过滤层析对F蛋白进行纯化。经过两步层析可以得到高度纯化的F蛋白,且在纯化过程中保持了F蛋白的抗原性,纯化的F蛋白仍然能被一组单克隆抗体检测到。通过SDS-PAGE、Western Blot检测,其为140kD的同型二聚体。经此纯化方案,每10个T-75细胞培养瓶培养的病毒可以获得大约85μg的F蛋白。