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本实验从形态、生理方面研究太空诱变对金钗石斛(Dendrobium NobileLindl)的影响,并借助蛋白质组学技术分析太空诱变金钗石斛种子后代叶片蛋白表达差异,并对其进行功能分析,从蛋白质组水平深化太空环境对金钗石斛生长发育影响的认识。 1.选取金钗石斛成熟种子,分成两份,一份搭载神舟八号飞船,17天后返回地面,另一份4℃下保存17天作为对照。无菌条件下将两份种子播种在1/2MS+0.5%琼脂+30g/L蔗糖+40g/L香蕉+0.5g/L活性炭(pH5.6)基本培养基上培养。 2.经太空诱变的金钗石斛种子萌发启动的较慢,萌发率偏低,大概两周后才开始转绿,原球茎呈黄绿色,开始分化的时间比对照晚5天左右。测定120天左右的幼苗形态指标可知,总体上说太空苗呈矮化、分蘖多、茎粗短、叶宽、叶厚、根短少的趋势;一部分太空苗出现分蘖增多现象,一部分太空苗分化出花芽,还有一部分呈白化突变,叶绿素、类胡萝卜素的含量显著高于对照;叶肉细胞层数多,上表皮细胞大,叶脉小维管束数量多,大维管束韧皮部小。经太空诱变的金钗石斛叶片叶绿体形状多变呈椭圆,圆形等,基粒数量多,直径短,部分解体,嗜锇颗粒明显增多。 3.分别取分蘖多的太空苗(T1),开花的太空苗(T2),及对照(CK)植株的地上部分作为双向电泳的实验材料,研究太空诱变金钗石斛幼苗的蛋白质差异表达变化情况。63个蛋白在CK与T1之间发生可重复的显著变化,其中30个上调表达,33个下调表达;79个蛋白点在CK与T2之间发生可重复的显著变化,其中52个蛋白表达上调,30个蛋白下调;9个蛋白点在T1与 T2之间发生可重复的显著变化,其中6个蛋白表达上调,3个蛋白表达下调。选取其中积分值高、表达变化程度大且具有代表性的45个蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS串联质谱分析。36个蛋白得到有效鉴定,鉴定的蛋白质主要与物质和能量代谢,生物合成,应激响应,信息传递,运动等生物学功能相关。