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本文研究目的：探讨H22肿瘤来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物是否能够诱导gp96-多肽复合物特异性的细胞毒性T淋巴细胞反应(cytotoxicTlymphocytes，CTL)，并研究该CTL细胞的抗肿瘤效应。
研究方法：
1.从H22肿瘤细胞中提取gp96-多肽复合物：制备H22肝癌细胞蛋白，经硫酸铵分级盐析、ConA-Sepharose亲和层析、G-25柱凝胶过滤及DEAE-Sephacel离子交换层析获得目的蛋白，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blot鉴定为热休克蛋白GP96-多肽复合物，Bradford法测定其浓度。
2.利用细胞培养技术、流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测gp96-肽复合物体外诱导脾淋巴细胞的CTL反应，分析经诱导前后脾淋巴细胞的膜表面分子CD4+、CD8+T细胞的表达变化。
3.CCK-8法观察致敏后的淋巴细胞对靶细胞的杀伤作用以及过继免疫保护实验分析其抗肿瘤免疫保护效果；
4.激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察CTL培养上清诱导H22肿瘤细胞的形态学改变。5.半定量RT-PCR法检测活化脾细胞的TNF-αIFN-γmRNA的表达变化。
研究结果：
1.经鉴定获得纯化的热休克蛋白gp96。
2.式细胞仪检测表明，经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70％远远高于对照组的38％、27％(P＜0.05)；而CD4+T细胞比例在诱导后为37％，低于诱导前的76％。
3.该活化的CTL细胞在效靶比为50：1时的肿瘤杀伤率达72％与对照组相比具有统计学意义，其培养杀上清能诱导H22肿瘤细胞的凋亡；
4.将活化的CTL细胞回输小鼠体内能产生对该肿瘤细胞良好的过继性免疫保护作用，能延长荷瘤小鼠的生存时间；
5.另外，RT-PCR法检测表明该致敏的脾细胞较正常脾淋巴细胞高表达IFN-γ、TNF-αmRNA。
研究结论：gp96-多肽复合物能与体外诱导小鼠脾细胞的CTL反应，并增强脾细胞IFN-γ、TNF-αmRNA的表达，该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤的免疫保护作用。