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目的:目前研究表明结直肠癌的发病率以及死亡率正日益增长,结直肠癌是消化道肿瘤中较常见的一种,在全球男性最常见癌症中排第三位,女性中排第二位,2012年估计有136万新增病例[1],它也是世界第四大最常见的癌症死亡原因(2008和2012),占所有癌症死亡人数的8.5%,并且每年死亡数接近69万人[1]。结直肠癌的发病机制目前尚未明确,一般认为大部分的结直肠癌是来源于结直肠腺瘤,其中结直肠腺瘤可分为管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤,加强对结直肠腺瘤认识,对预防结直肠癌起到至关重要的作用。结直肠癌的发生、发展与多种因素有关,结直肠粘膜上皮细胞癌变是多步骤、多阶段及多基因参与的过程。此过程不仅涉及细胞过度增殖,并且与细胞凋亡有着密切的联系。Beclin1与酵母自噬基因ATg6/Vps30是同源基因,1998年,Liang等[2]在对Sinbis病毒感染的致死性病毒性脑炎中发现一种新的60k Da的卷曲蛋白质,可以与bcl-2的基因产物bcl-2相互作用,它们将其命名为Beclin1,它位于人类染色体17q21并且可以编码与凋亡控制蛋白bcl-2相互作用的蛋白。它是自噬过程中关键的调节因子。此外,Beclin1与许多生物学途径密切相关,包括对压力的适应,发育,胞吞,胞质分裂,免疫,肿瘤的发生,老化及细胞凋亡。它的功能在多种机制中被检测出,比如表观遗传沉默,micro RNA的调控,翻译后修饰,蛋白质-蛋白质相互作用等。多种疾病与Beclin1的缺乏及功能异常有关,这使它成为各种治疗方法的一个潜在的有价值的靶向,包括抗癌治疗。已有相关研究证实Beclin1在肿瘤的生长中起到重要作用,但是机制仍不能明确,有的研究认为它是通过诱导肿瘤细胞的自噬性死亡或者凋亡来抑制肿瘤细胞的增殖,或是通过预防肿瘤炎症反应及坏死反应而抑制肿瘤的发生发展。其在宫颈癌、子宫内膜癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,并在这些癌症组织中存在基因的缺失性突变。但在结肠癌中Beclin1高表达,其在结肠癌组织中异常高表达的作用机制仍不十分明确。Lin28是一种RNA结合蛋白。Lin28b与Lin28是同源基因,Lin28与KLF4、SOX2、NANOG共同在体细胞中表达时,可以将体细胞逆转成多功能干细胞。Lin28和Lin28b都含有冷休克结构域(cold shock domain,CSD)和一对反向的CCHC锌指模体,这些结构使得它能与RNA结合。Lin28阻断le-t 7家族mi RNA的加工处理,Lin28/let-7参与多种生物功能,包括肿瘤的发生,Lin28b通过阻断let-7通路促进肿瘤的发生,激活Lin28b的表达还可以促进肿瘤细胞的转移。本实验旨在通过对结直肠癌、结直肠管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤及正常结直肠粘膜中Beclin1及Lin28b的表达情况的研究,探讨其在结直肠腺瘤发展过程中的作用及意义,以期为结直肠肿瘤的早期诊断及治疗提供有利的理论依据。方法:收集2012年1月至2014年8月解放军252医院经外科手术切除的结直肠癌100例及配对正常结直肠粘膜组织60例(亦称为癌旁组织,取自手术切除残端,距离癌组织至少5cm),100例结直肠癌患者术前均未接受化疗、放疗及靶向治疗。消化内镜中心获取100例结直肠腺瘤组织,其中包括结直肠管状腺瘤30例,混合性结直肠腺瘤35例,绒毛状结直肠腺瘤35例(所有组织均由经验丰富的病理科医师审查及筛选)。将每次获得的部分新鲜组织放入RNA保存液中后置于-20℃的冰箱中,用于进行荧光定量PCR,另一部分放于10%的甲醛中固定、石蜡包埋、常规连续切片,然后进行免疫组织化学染色。1 HE染色用于区分目标组织的病理类型和分化程度。2应用免疫组织化学的方法检测Beclin1及Lin28b的表达产物在细胞中的定位及表达的强度。3利用荧光定量PCR的方法检测Beclin1m RNA及Lin28bm RNA在组织中表达量。统计学方法:应用SPSS17.0统计学软件的卡方检验及单因素方差分析对数据进行统计分析,P<0.05差异有统计学意义。结果:1免疫组织化学检测结果:Beclin1和Lin28b染色的阳性物质为棕黄色,均表达于胞质中。在结直肠癌组织、结直肠腺瘤组织、结直肠正常组织中Beclin1的阳性表达率分别为85%、73%、35%,三者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。在结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤中阳性表达率分别为43.3%、60%、82.9%,统计学分析结果在不同类型的结直肠腺瘤中Beclin1的表达情况的差异有统计学意义(P<0.05),Beclin1的表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、Dukes分期有关(P<0.05),而与年龄及性别无关(P>0.05)。在结直肠癌组织、结直肠腺瘤组织、结直肠正常组织中Lin28b的阳性表达率分别为80%、65%、30%,三者有统计学意义(P<0.05)。在结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤中阳性表达率分别为33.3%、65.7%、77.1%,统计学分析结果在不同类型的结直肠腺瘤中Lin28b的表达情况的差异有统计学意义(P<0.05),Lin28b的表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、Dukes分期有关(P<0.05),而与年龄及性别无关(P>0.05)。2荧光定量PCR检测结果:应用半定量的Taq Man PCR对所留取的结直肠癌组织、结直肠绒毛状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠管状腺瘤、结直肠正常粘膜进行检测,Beclin1 m RNA在组织中的表达量分别为8.196±0.760、5.680±1.178、3.898±0.520、3.566±0.625、0.312±0.419,在上述组织中的表达量依次降低,F=75.11074,P<0.05。SNK多重比较结果显示任两组间总体均数差异具有统计学意义,Lin28b m RNA在结直肠癌组织、结直肠绒毛状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠管状腺瘤、结直肠正常粘膜组织中的表达量分别为17.994±2.044、11.080±0.947、7.232±1.580、3.966±0.833、1.656±0.740,在上述组织中的表达量依次降低,F=117.5025,P<0.05。SNK多重比较结果显示任两组间总体均数差异具有统计学意义。结论:无论是Beclin1还是Lin28b在结直肠癌组织中均高表达,在正常粘膜中低表达,并在腺瘤组织中随着绒毛含量的增加表达量也随之增加,在结直肠癌组织中两者均表达最强,提示两者均可能参加结直肠腺瘤向结直肠癌转变过程,可能成为预测结直肠腺瘤癌变的重要指标,同时也为结直肠癌的靶向治疗提供了分子生物学的依据。