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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)病变部位从内膜开始,常好发于血管弯曲、分叉的区域,为低剪切应力或震荡剪切应力区域。低剪切应力诱导的内皮间质转化在As中起着重要作用,但其调控机制尚不清楚。当内皮细胞发生内皮间质转化时,内皮细胞间的紧密连接被破坏,细胞增殖、侵袭和迁移能力增加。研究发现miR-320的过表达可以抑制子宫内膜癌细胞增殖、细胞迁移、细胞周期和侵袭。因此本文将探讨miR-320与低剪切应力诱导的内皮间质转化间的关系及其调控机制。目的:探讨miR-320在低剪切应力诱导内皮间质转化中的作用及其调控机制。方法:通过转染miR-320 mimics或miR-320 inhibitor,构建过表达miR-320血管内皮细胞和miR-320表达抑制的血管内皮细胞。在静态培养条件下,实验分组为:空白对照组、miR-320过表达组(miR-320mimics)、miR-320过表达对照组(mimics control);空白对照组、miR-320抑制组(miR-320 inhibitor)、miR-320抑制对照组(inhibitor control),RT-qPCR检测miR-320的水平。Western bott免疫印迹检测血管内皮细胞表面抗原CD31、VE-Cadherin的表达、间充质细胞表面抗原α-SMA、Vimentin的表达、SOX4、Wnt/β-Catenin信号通路下游靶基因β-Catenin、CD44、Cyclin D1、AXIN2的表达。划痕实验、transwell实验检测miR-320对血管内皮细胞迁移、侵袭的影响。罗丹明鬼笔环肽染色检测对血管内皮细胞骨架的影响。采用CCK8与MTT实验检测miR-320对血管内皮细胞的增殖影响,流式细胞仪检测血管内皮细胞周期。采用平行平板流动腔系统在低剪切应力(4dyn/cm2)下灌流6小时,实验分组如下:空白对照组、miR-320过表达组(miR-320mimics)、miR-320过表达对照组(mimics control);空白对照组、miR-320抑制组(miR-320 inhibitor)、miR-320抑制对照组(inhibitor control)。结果:miR-320 mimics处理的血管内皮细胞miR-320水平明显增加。静态培养下miR-320 inhibitor下调内皮细胞标记物VE-Cadherin、CD31的表达,上调间质细胞标记物Vimentin、α-SMA的表达明显升高,表明抑制miR-320促内皮间质转化。miR-320 mimics上调VE-Cadherin、CD31表达增加,抑制Vimentin、α-SMA的表达,表明miR-320过表达可以抑制内皮间质转化。miR-320 inhibitor上调Wnt/β-Catenin信号通路下游靶基因β-Catenin、Cyclin D1、CD44的表达,抑制AXIN2的表达,表明miR-320 inhibitor激活Wnt/β-Catenin信号通路。miR-320 inhibitor组的HUVECs细胞骨架微丝增粗,应力纤维增多,miR-320 mimics组微丝变细,应力纤维减少。miR-320inhibitor促HUVECs迁移,但对HUVECs的增殖及无明显影响。生物信息学预测分析表明SOX4可能为miR-320调控的靶基因,Western blot检测结果证实miR-320 mimics下调SOX4的表达,miR-320inhibitor上调SOX4的表达。miR-320 inhibitor进一步抑制低剪切应力下内皮细胞表面标记物VE-Cadherin、CD31表达,进一步上调低剪切应力下间质细胞表面标记物Vimentin、α-SMA的表达,且Wnt/β-Catenin信号通路下游靶基因β-Catenin、Cyclin D1、CD44的表达增加,而AXIN2降低,表明抑制miR-320进一步增强Wnt/β-Catenin信号通路促低剪切应力诱导的内皮间质转化。miR-320 mimics上调低剪切应力下内皮细胞表面标记物VE-Cadherin、CD31表达,抑制低剪切应力下间质细胞表面标记物Vimentin、α-SMA的表达,且β-Catenin、Cyclin D1、CD44的表达降低,而AXIN2增加,表明miR-320过表达通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路部分逆转低剪切应力诱导的内皮间质转化。结论:miR-320可能是通过SOX4/β-catenin信号通路调节低剪切应力诱导的内皮间质转化。