国内外学者已证明骨髓、脂肪、皮肤和神经等多种组织中含有成体干细胞，口腔医学研究领域也已发现牙髓和牙周组织中有成体干细胞存在。鉴于口腔黏膜与皮肤表皮均是由外胚层发育而来，且存在相似的组织结构，本课题借鉴皮肤表皮干细胞分离及鉴定方法分离鼠颊黏膜干细胞，探索口腔黏膜干细胞体外分离、培养和纯化方法，获得稳定生长的鼠颊黏膜干细胞。 第一章鼠颊黏膜干细胞的分离及培养 目的：探讨鼠颊黏膜干细胞体外分离和培养方法，并初步纯化。 方法：DispaseⅡ酶和Trypsin-EDTA两步法分离昆明小鼠颊黏膜上皮细胞，接种在以NIH3T3细胞为滋养层的培养板中。DMEM培养24h后换用黏膜干细胞培养基继续培养，部分细胞72h后行成骨、成脂诱导和AKP染色鉴定；部分细胞继续培养5d后，消化转移至Ⅳ型胶原预包被的培养板中，加入黏膜干细胞培养基培养，观察细胞克隆形成和成骨、成脂诱导、CK和AKP染色。 结果：初次分离的上皮细胞群83.96％处于G0/G1期，培养72h后可见克隆样生长细胞，成骨、成脂诱导和AKP染色均呈阳性；细胞在Ⅳ型胶原包被的培养板上快速贴壁，呈圆形或卵圆形，胞体较小，折光性较强，克隆样生长，成骨、成脂诱导和CK、AKP染色均呈阳性，3w后干细胞以自己为中心向周围分化。 结论：运用滋养层细胞培养法可获得大量干细胞样上皮细胞，Ⅳ型胶原黏附结合黏膜干细胞培养基培养法可实现鼠颊黏膜干细胞的初步纯化。 第二章p63蛋白在鼠颊黏膜干细胞的表达 目的：检测p63蛋白在鼠颊黏膜干细胞中的表达。 方法：以鼠抗人/鼠p63蛋白为一抗，FITC标记的羊抗鼠为二抗，免疫荧光显微镜检测p63蛋白在BcaCD885细胞和鼠颊黏膜干细胞的表达。 结果：在免疫荧光显微镜下观察，两种细胞胞核中均发出p63蛋白的绿色荧光，鼠颊黏膜干细胞克隆样生长区域荧光亮度高于已分化细胞和BcaCD885细胞。 结论：p63蛋白在鼠颊黏膜干细胞中强烈表达，可作为鉴定该细胞的分子表面标志，同时为“癌症起源于正常成体干细胞恶性变”这一假说提供参考。