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目的:检测岩藻糖基转移酶-8(fucosyltransferase-8,FUT8)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾组织中的表达,探讨其与肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的时空关系。方法:(1)实验分组清洁级雌性Wistar大鼠90只,6~8周龄,随机分为3组:正常组(CON组,n=30)、单侧输尿管梗阻组(UUO组,n=30)、假手术组(SOR组,n=30)。UUO组为打开腹腔游离左侧输尿管上段,在近肾盂处结扎输尿管;SOR组为打开腹腔,游离左侧输尿管近肾盂端,但不结扎输尿管。其中UUO组随机分别在手术后的1d、3d、7d、14d、21d放血法处死,标记为UUO1d、UUO3d、UUO7d、UUO14d、UUO21d;处死时下腔静脉采血5ml,分离上清保存于-20℃,检测血肌酐(serum creatinin ,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen ,BUN)。取左肾,小心剥去肾包膜后,置于滴有生理盐水的平皿上,一部分新鲜肾组织做冰冻切片间接免疫荧光,另取一部分10%甲醛固定,剩余肾皮质冻存于-80℃用于RT-PCR和Western blot分析。(2)肾组织石蜡切片行PAS、Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾脏组织病理改变。(3)免疫荧光新鲜肾组织冰冻切片,胎牛血清封闭,依次滴加一抗、荧光标记二抗,最后甘油封片,荧光显微镜下观察各组大鼠肾组织不同时间点FUT8、ALK5的分布以及表达。(4)RT-PCR检测各组大鼠肾组织不同时间点FUT8 mRNA的表达。(5)Western blot检测各组大鼠肾组织不同时间点FUT8在蛋白水平的表达。(6)免疫组化检测大鼠肾脏纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。结果:(1)肾组织病理改变:与CON组和SOR组比较,UUO组肾脏呈进行性间质纤维化改变,包括肾小管细胞空泡样变性,炎症细胞浸润,进而肾小管萎缩﹑扩张,肾间质纤维化等。UUO手术后3d可见小管间质内有散在炎症细胞浸润,部分小管空泡变性;术后7d出现大量炎症细胞浸润,偶见萎缩肾小管; 14d肾脏间质明显纤维化;21d上述改变更加明显,肾小管基底膜增厚萎缩;在观察时间内均未见明显肾小球硬化。(2)CON组和SOR组大鼠血清Scr、BUN无统计学意义(P>0.05);UUO组Scr、BUN在UUO7d、UUO14d、UUO21d时高于CON组和SOR组(P<0.05)。(3)间接免疫荧光结果:CON组和SOR组大鼠肾组织,FUT8主要在肾小管有较低的表达(+),肾小球仅偶有极微量(±)表达,两组FUT8的表达没有统计学意义(P>0.05);在UUO组的大鼠肾组织中,在肾小球未观察到FUT8的阳性表达,术后3d FUT8在肾小管表达明显增强,在14d时达到高峰,21d表达下降,其中UUO7d、UUO14d、UUO21d与CON组和SOR组比较差异有统计学意义(P<0.05)。ALK5在肾小管的表达与FUT8一致,在手术后3d逐渐增加,14d达到高峰,随后21d下降,二者呈正相关(r =0.87 ,P<0.05)。FUT8与ALK5荧光共染发现两者在肾小管的分布一致,且两者共表达区域随着肾纤维化进展逐渐增加。(4)RT-PCR检测FUT8在基因水平的表达:CON组FUT8 mRNA微量表达;SOR组在手术后1d较CON组略微有所增高,但两组之间差异无统计学意义(P>0.05);在UUO手术后3d FUT8 mRNA的表达较CON组和SOR组显著增加,在14d达到高峰,21d下降;UUO7d、UUO14d、UUO21d FUT8 mRNA的表达与CON组比较有统计学意义(P<0.05)。(5)Western blot检测FUT8在蛋白水平的表达:CON组和SOR组FUT8在蛋白水平都有微量表达,SOR组表达高于CON组,但两组之间无统计学意义(P>0.05);UUO组与两组比较FUT8蛋白表达均增加且呈逐渐上升趋势,在14d达到高峰,21d下降,但都较CON组显著增加;其中UUO7d、UUO14d、UUO21d组与CON组、SOR组比较FUT8蛋白表达有显著差异(P<0.05)。(6)免疫组化显示:UUO组大鼠梗阻侧肾组织FN、Ⅰ型胶原、α-SMA阳性染色面积随梗阻时间延长逐渐增加,其中UUO7d、UUO14d、UUO21d与CON组和SOR组比较有显著差异(P<0.05)。FN、Ⅰ型胶原、α-SMA的表达与FUT8呈正相关(r分别为0.80 ,0.76,0.89,P<0.05)结论:在单侧输尿管梗阻所致的肾间质纤维化的发生和进展中,FUT8与ALK5表达呈时空一致性升高,与肾间质纤维化程度密切相关。