【摘 要】
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该研究选用马铃薯抗青枯病品种MS-42.3作为实验材料,采用RNAgents mRNA Isolation System和Marathon cDNA Amplification Kit合成了含连接头(adaptor)的双链cDNA.在已知API蛋
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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该研究选用马铃薯抗青枯病品种MS-42.3作为实验材料,采用RNAgents<> mRNA Isolation System和Marathon cDNA Amplification Kit合成了含连接头(adaptor)的双链cDNA.在已知API蛋白编码基因3端序列的基础上,采用RACE PCR和Nested PCR技术扩增出了5端序列.将5端片段与pGEM-T Easy Vector连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选鉴定重组质粒,进行双向测序,获得了完整的AP1蛋白编码基因的5端序列.采用Sewing PCR技术,将AP1蛋白编码基因的3和5端序列连接起来,获得了具有完整阅读框架的AP1蛋白编码基因.对AP1蛋白编码基因和表达载体pET-5a进行双酶切,用T4 DNA连接酶将二者连接起来,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,筛选鉴定重组质粒,成功地构建了AP1蛋白编码基因在大肠杆菌中的融合蛋白表达载体.将此表达载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS,获得了其在大肠杆菌中的正确表达.对表达产物进行Western blot分析结果表明,此融合蛋白可与AP1蛋白的纯化抗体发生特异免疫反应.初步测定了AP1蛋白编码基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白对青枯菌PO41的抑菌活性,结果表明其具有明显的抑菌活性.
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