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白花丹科补血草属植物中华补血草(Limonium sinense(Girard)Kuntze),为多年生泌盐草本植物,广泛分布于我国东北、华北等地区,尤以江苏省沿海滩涂分布甚广。目前对其药理作用的研究主要集中在抗菌、抗病毒、补血止血等方面。本课题组前期研究发现,中华补血草粗提物具有增进免疫、抗肿瘤以及对抗正常细胞损伤等多种药理活性,且其多糖类成分含量丰富。本论文采集江苏盐城滩涂产中华补血草,研究其多糖成分的提取、分离纯化、化学结构特征以及抗肿瘤和免疫调节作用,为中华补血草开发利用提供实验依据。
1.运用单因素和响应面试验研究中华补血草总多糖(LSP)的提取条件,确定了总多糖的最佳提取条件为:提取温度95℃；超声时间50 min；料液比1:12；提取2次后醇沉。采用该工艺提取的LSP得率为12.80％,苯酚-硫酸法测定中华补血草总多糖含量为60％。运用DEAE-52纤维素柱层析方法,得到中华补血草多糖的3种组分:LSPD-1,LSPD-2,LSPD-3,再分别过Sephadex G-100凝胶柱进一步纯化,得到LSPs-1,LSPs-2,LSPs-3三组分,经高效液相检测,呈单一对称峰,表明达到均一纯度。
2.采用UV、HPLC、GC等分析手段,分析了LSPs-1,LSPs-2,LSPs-3的单糖组成和平均分子量。该3种组分的紫外光谱在260 nm-280 nm处无明显的吸收,表明不含核酸、蛋白质。HPLC测定3种组分的平均分子量分别为:1.31×105 Da,1.33×105 Da,1.65×106 Da。GC结果显示:LSPs-1主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成,其摩尔比为1.77:1:2.38；LSPs-2主要由葡萄糖、鼠李糖和甘露糖组成,其摩尔比为1:11.67:2.24:LSPs-3主要葡萄糖和木糖组成,其摩尔比为1:1.01。
3.研究了LSP抗肿瘤和免疫调节两个方面的药理活性。结果显示,400 mg／kgLSP显著抑制荷瘤小鼠瘤体的生长,抑瘤率达38％,LSP能部分抑制离体培养的HepG2、Hela等肿瘤细胞的生长,但抑制率低于常用抗肿瘤药物5-Fu。与抗肿瘤药5-Fu联合使用后,对heps实体瘤小鼠瘤体生长的抑制率增加了23.8％,同时降低了5-Fu免疫毒性,表明其与化疗药物联用具有减毒增效作用。免疫调节试验结果表明,100 mg／kg LSP能对抗环磷酰胺(CTX)的免疫抑制作用,提高巨噬细胞吞噬活性、小鼠溶血素水平、脾脏细胞体外增殖,即显著提高小鼠非特异性免疫和特异性免疫活性。
总之,本论文运用单因素和响应面试验优化了LSP的提取条件；采用UV、HPLC、GC等分析手段分析了LSPs-1,LSPs-2,LSPs-3三个组分；同时发现LSP能对抗CTX诱导的免疫功能低下并且联合化疗药物5-Fu能起到减毒增效作用。