嗜热真菌分类及嗜热子囊菌光孢变种内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

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嗜热真菌在高温条件下具有独特的生存适应能力,产生嗜热酶等特殊的代谢产物,是研究生物进化和热稳定酶的重要微生物来源。本研究的第一部分主要是进行了中国嗜热真菌的分类研究。从2002-2004 年本实验室采集的600 多份标本中共分离鉴定到嗜热真菌15种,其中,新种1 个,中国新记录种9 个,中国已报道种4 个,不确定种1 个,另外还分离鉴定了4 种耐热真菌。本研究较全面、系统地对嗜热真菌进行了考察、收集、分离、鉴定和形态描述,并分别对每个种的基质、生境及分布等做了统计,对相似的种间进行了比较和讨论。在前人工作的基础上,增加了新种及若干新记录种,总结出比较简便易行的种级分类标准和我们自己的分类观点。孢子的特征(包括形状、大小、颜色、隔膜数和表面纹饰等)是种级分类的主要依据,一些形态差异较大的孢子可作为属的划分标准;其次,分生孢子梗的形态特征、产孢细胞的延伸方式及产孢方式也是主要的鉴别依据,对属级水平上该真菌的鉴别有重要意义;另外,培养特征及产孢表型可作为分类鉴定的必要、有益补充。嗜热子囊菌光孢变种在45~50℃高温下生长旺盛,产生的纤维素酶在高温条件下保持较高的活力和热稳定性。本研究的第二部分主要是探讨了该嗜热真菌产生的内切β-葡聚糖酶与β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究。粗酶液依次经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 阴离子层析、Pheny1-Sepharose 疏水层析、SephacrylS-100 分子筛层析等步骤获得凝胶电泳谱带均一的内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。经12.5%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析法分别测得所纯化的内切β-葡聚糖酶分子量介于31.5kDa~34.5kDa 之间;所纯化的β-葡萄糖苷酶分子量约为350kDa,为同源三聚体蛋白质。
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