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目的:观察丹参(Salvia miltiorrhiza)、血府逐瘀汤(Xuefuzhuyu soup)含药血清对体外培养的兔骨髓间充质干细胞增殖、迁移的影响,以及服药前后血清SDF—1浓度的变化。
方法:新西兰大耳兔24只随机分为空白对照组、丹参组和血府逐瘀汤组(下简称血府组),每组8只,灌胃法喂服动物中药水煎液,分别给予蒸馏水、丹参水煎液和血府逐瘀汤水煎液7天,并于服药前后抽取动脉血提取血清;使用密度梯度离心法、贴壁筛选法分离、培养兔BMSCs,倒置显微镜下连续观察细胞形态变化,利用甲基偶氮唑盐(MTT)法绘制BMSCs生长曲线,免疫组化检测CD44+、Vimentin表达;TRANSWELL迁移实验系统观察各组含药血清对BMSCs迁移情况,MTT法测定BMSCs倍增时间;ELISA法测定血清SDF-1浓度。
结果:
1、利用密度梯度离心法可成功培养BMSCs,培养的BMSCs表面CD44和Vimentin表达阳性率分别为91.4%和88.7%。
2、空白对照组、丹参组、血府组BMSCs的倍增时间(54.27±7.2)h、(47.35±4.2)h、(48.12±3.98)h,与对照组比较,丹参、血府组与空白对照组比较均有显著差异(P<0.05),丹参和血府组二者差异无统计学意义(P>0.05)。
3、空白对照组、丹参组、血府组迁移细胞数分别为11±6、18±5、20±4,与对照组比较,丹参组和血府组差异有统计学意义(P<0.05)。
4、空白对照组、丹参组、血府组服药前后血清SDF-1浓度比较,空白对照组(P>0.05)、丹参组(P<0.05)、血府逐瘀汤(P<0.05)。
结论:
1、体外培养的兔BMSCs一般形状、细胞表面标记符合BMSCs特征,增殖活性良好。
2、丹参和血府逐瘀汤含药血清均能促进体外培养的兔BMSCs的迁移。
3、丹参和血府逐瘀汤含药血清均能显著促进体外培养兔BMSCs的倍增。
4、丹参和血府逐瘀汤二者的促进体外培养的兔BMSCs动员作用差异无显著性。