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鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方最为常见的头颈恶性肿瘤之一,恶性度高,其发病部位和颅底相邻,位置深在,若不治疗进展快速,治疗上首选放射治疗。但在放射治疗中,无论放射野如何设计,在杀死肿瘤组织治疗的同时也对照射野内正常组织造成一定的影响,而咽鼓管紧邻鼻咽,其所受的影响是直接的,而咽鼓管功能的好坏直接影响中耳功能,因此建立咽鼓管电离辐射的动物模型可直接研究电离辐射对咽鼓管功能的影响。目前国内外关于动物的电离辐射模型研究较少,其中最多的是豚鼠。但因豚鼠对电离辐射的耐受能力不强,死亡率高,利用豚鼠开展电离辐射的研究受限。而新西兰兔生理结构更接近人体结构,体形大,体重比豚鼠重,理论上对电离辐射的耐受能力更强,故本实验将利用新西兰兔建立电离辐射的动物模型,探讨电离辐射早期咽鼓管所受的影响。
实验中,因涉及麻醉问题,而麻醉药物对动物的影响很大;另外,不同组织对电离辐射的耐受能力不同,剂量超过30Gy可造成分泌性中耳炎,超过60Gy的死亡率增加。故为控制麻醉次数和死亡率,参考Ohashih等(1988年)的单次剂量30Gy和蒋爱云等(2000年和2004年)的观察时间和放射总剂量(60Gy),本实验设计了30Gy的1次大剂量照射和总剂量为60Gy与30Gy(分割为10Gy/次,最大麻醉次数6次)的实验方案,目的:①模拟鼻咽癌患者的电离辐射治疗方法,探讨新西兰兔电离辐射模型的可行性;②研究不同电离辐射剂量下咽鼓管的形态学变化,了解电离辐射早期对咽鼓管功能的影响,寻找预防电离辐射损伤的方法。
材料与方法:
1、研究对象及分组
24只健康新西兰兔,体重2.3±0.2 kg,内镜检查外耳道皮肤无红肿,鼓膜正常,将其随机分成四组(每组6只):A组(对照组),B组(30G/次*1次),C组(10G/次*3次),D组(10G/次*6次)。
2、方法:
用3%戊巴比妥钠(1ml/Kg)麻醉后放疗,照射野4cm x4cm,上界:双眼后眦连线,下界:双耳后连线,源皮距97.50cm,剂量深度2.50cm,2Gy/min。对照组麻醉后假照射。放疗后1天、1周、2周、4周、8周、12周各组随机取1只兔子处死后取咽鼓管组织做HE染色。
结果:
1.各组内电离辐射对咽鼓管的形态学影响:
A组(对照组):12周内咽鼓管上皮纤毛完整,底部分泌性细胞丰富,上皮细胞排列有序,腭帆张肌、咽鼓管软骨正常,管腔内干净,通畅。
B组(30G/次*1次):咽鼓管上皮损伤严重,纤毛脱落,分泌性细胞减少、甚至消失——前4周咽鼓管内见大量脱落上皮样组织、浆液性物质以及纤毛,分泌性细胞减少,第4-12周咽鼓管上皮组织坏死缺失严重,纤毛消失,腔内见大量脱落组织,分泌性细胞消失。放疗后腭帆张肌、咽鼓管软骨无明显变化。
C组(10G/次*3次):第1周咽鼓管上皮损伤明显,纤毛局部脱落,分泌性细胞减少,但程度比B组弱,第2-12周后假复层纤毛柱状上皮纤毛和分泌细胞形态基本正常;咽鼓管通畅,放疗后腭帆张肌、咽鼓管软骨形态无明显变化。
D组(10G/次*6次,):前4周对假复层纤毛柱状上皮损伤严重,纤毛脱落,分泌性细胞减少,咽鼓管欠通畅,第4-12周可见纤毛柱状上皮纤毛、分泌性细胞渐增多,咽鼓管通畅,放疗中腭帆张肌、咽鼓管软骨形态正常。
2、各组间电离辐射对咽鼓管形态学影响的比较:
①各组间假复层上皮的纤毛以B组损伤最明显,放疗后的12周内无减轻迹象,D组相对C组严重,C组在放疗后1周损伤渐减轻,D组在放疗后2周损伤渐减轻,到第8周后C组和D组的损伤均不明显。
②各组间假复层上皮的分泌细胞损伤明显,其中B组放疗后12周内的损伤无减轻,而C组在放疗后第2周始渐减轻,D组在放疗后第4周始渐减轻,在第8-12周时两组的损伤均不明显。
③放疗后各组的腭帆张肌、咽鼓管软骨无明显变化。
结论:
1、①在电离辐射总放射剂量相同时,单次大剂量放疗比分割剂量放疗对咽鼓管所造成的损伤大;②电离辐射总剂量不同时只要合理分割放疗剂量,总剂量大的电离辐射引起的损伤比单次大剂量的还要小。
2、①30Gy剂量的单次放疗早期引起咽鼓管的损伤严重,表现为咽鼓管纤毛受破坏,上皮组织的坏死脱落以及浆液性渗出,最后导致咽鼓管功能障碍;②咽鼓管软骨、腭帆张肌在放疗早期无受影响的迹象。
3、利用新西兰兔作为中耳电离辐射的动物研究模型是可行的。