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骨骼肌占产肉动物躯体的40%,是动物躯体中最重要的组成部分,也是影响肌肉品质的重要因素之一,因而影响肉质生产的骨骼肌基因是家畜分子育种工作中重要的候选基因。肌钙蛋白12型(TNNI2)基因和肌钙蛋白T1 (TNNTl)作为快骨骼肌基因,在动物骨骼肌生长发育过程中起着重要的调控作用,是影响动物屠宰性能的重要功能基因:肌钙蛋白T2 (TNNT2)作为心肌亚型在影响心肌组织的正常活动方面具有很大的研究价值。本研究运用RT-PCR结合克隆测序方法分别获得了天府肉羊TNNT1、TNN12和TNNT2基因的全编码区序列。结果显示:TNNT1基因CDS区长度是759 bp,编码252个氨基酸,得到的蛋白序列含有一个保守结构域,7个磷酸化位点,且该蛋白质的二级结构只具有α-螺旋和无规则卷曲,没有延伸片段,提交NCBI获得登录号:KF939315; TNNT2基因具有较长的CDS区858 bp,编码285个氨基酸,蛋白序列含有15个磷酸化位点和一个保守结构域,蛋白二级结构主要为无规则卷曲和α-螺旋,提交NCBI得到登录号KF939316;克隆出天府肉羊的TNNI2基因,在NBCI数据库中blast,发现CDS区长度为549 bp,编码187个氨基酸。得到的该蛋白序列有1个保守结构域,存在6个磷酸化位点,蛋白质二级结构以无规则卷曲和a-螺旋为主,序列提交NCBI获得登录号:KF939314。对天府肉羊TNNT1氨基酸序列进行比对,结果显示天府肉羊与牛属、人属、海豚属、绵羊属、藏羚属、八齿鼠属、大熊猫属、猪属、羊驼属和猫属的相似性则分别为94%、92%、93%、72%、85%、91%、92%、93%、93%和91%,在TNNT1基因与其他物种的进化关系中,天府肉羊TNNT1基因与猪的关系最近,其次为绵羊、藏羚羊、八齿鼠和牛,家猫、雪貂和大熊猫分在一支,灵长类聚为一支;TNNT2氨基酸序列进行比对,结果显示天府肉羊与牛属、人属、水牛属、长臂猿属、犀牛属、犬属、熊猫属、猪属、雪貂属和猫属的相似性分别为94%、88%、95%、88%、89%、89%、89%、91%、88%和89%;在进化关系中天府肉羊TNNT2基因与反刍动物牛的关系最近,与人、黑猩猩和长臂猿等灵长类动物聚为一支,然后与雪貂和熊猫聚为一支,猪和小须鲸聚为一支,狼和海象聚为一支;TNNI2氨基酸序列与海象、猪、大鼠、家兔、小鼠、人、荷兰猪、牛、黑猩猩和海豚的相似性分别为97%、96%、96%、95%、94%、96%、94%、98%、92%和92%,构建TNN12氨基酸序列的系统发育树中,天府肉羊与牛的亲缘关系最近,其次为海象、人、猪与海豚的最远。实时荧光定量RT-PCR技术测定天府肉羊的TNNT1、TNNT2和TNNI2基因在11个组织中的相对表达量,结果表明:TNNTl基因在肺脏中表达量最高,在心脏中表达量最低;在4个年龄阶段中,365日龄肺脏中的表达量高于其他年龄段。TNNT2基因在心脏中高表达,其次为肝脏和肺脏,其他8个组织之间差异不显著;在心脏中,TNNT2基因表达量随日龄的增长而增加。TNNI2基因在被检测的11个组织中,以腹肌中的表达量最高,其次为膈肌,在内脏组织中表达量最低,检测的肌肉组织中的相对表达量与内脏组织的差异极显著(P<0.01);在1日龄、183日龄、365日龄和730日龄腹肌组织中,365日龄与其他日龄间的差异极显著(P<0.01)。蛋白质免疫印迹(Westren Bloting)分析TNNT1蛋白在天府肉羊365日龄龄时8个组织中的表达情况,结果显示,在8个组织中都检测到信号,其中除膈肌信号弱外,其他都比较强;在表达量上只有比目鱼肌与眼肌之间差异显著(P<0.05)外,其他各个组织之间比较都表现为差异极显著(P<0.01)。