前言 大肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生率在北美、西欧和澳大利亚高居内脏恶性肿瘤的第一位，在我国仅次于胃癌、肺癌和肝癌而居恶性肿瘤的第4位，但是，随着人民生活水平的提高，发病率有逐年上升的趋势。所以，大肠癌的发生、发展及预防、治疗是当代肿瘤研究的一个热门课题。 维甲酸是一大类化合物，包括维生素A及其代谢产物，和具有类似结构或生物活性的天然及人工合成的衍生物。据报道，维甲酸类化合物对多种恶性肿瘤具有分化诱导、增殖抑制、凋亡诱导等作用，是一类疗效确切的抗肿瘤药物，在血液肿瘤和实体肿瘤的治疗方面已经取得令人瞩目的成绩。根据维甲酸分子的极性终末基团、环状终末基团和多烯侧链衍生基团的不同，将现存的上千种维甲类化合物分为三代。第三代维甲酸中，最有活性的化合物Ro40-8757，(4-{{12-{p-[(E)-2-(5，6，7，8-tetrahydro-5，5，8，8-tetra-methyl-2-naphthyl)propenyl」penoxy}ethyl}}-morpholine)因极少出现第一、二代维甲酸常有的副作用——高维生素A血症，引起了研究人员极大的兴趣。体外(in vitro)实验证实，Ro 40-8757可以抑制乳腺癌、宫颈癌、肺癌细胞、胰腺癌、皮肤癌等多种肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞周期发生改变。 本研究中，我们探讨了Ro 40-8757对大肠癌细胞系CCL-187的生长增殖、形态结构、细胞周期和细胞周期蛋白的影响，进而对其抗肿瘤机制进行初步分析，以研究Ro 40-8757治疗大肠癌的潜力，为大肠癌的临床治疗提供理论依据；也可以更全面的了解维甲酸类药物对肿瘤细胞的作用机理，指导合成新的维甲酸应用于肿瘤的治疗。 实验材料 人大肠癌细胞系CCL－187由美国哈佛大学Dana－Frber肿瘤研究所惠赠；Ro 40－8757，由 Dr．Miche＊ Claus（F．Hoffmann－LaRoche Ltd，Basle，瑞士）惠赠。 实验方法 CCL－187用含10 ％小牛血清的DMEM培养液，37℃，100呢湿度，5％CO。温箱单层传代培养。RO 40－8757以 DMSO配制浓度为10上m。VL贮存液，－SO℃避光保存，用时用培养液稀释成相应的浓度。 将 CCL－187细胞以 3 X 10’什孔接种于4个96孔板上，培养24小时后，加人终浓度分另为 3 X 10－‘、IX 10－‘、3 X 10－’、IX10－’、3 x 10－‘mol／L的 Ro 40－8757各 8复孔，并设 8复孔对照，每隔3天更换药物及新鲜培养液，分别培养3在JJ2天后，用M’IT法测定药物对肿瘤细胞的增殖抑制率。 CCL、187力人终浓度分别为 3 X 10－‘、IX 10－‘、3 X 10－’、IX10－’、3 X 10－’＊OI／L 的 RO 40－8757处理 6天，并设一瓶对照组，对照组加等量的DMSO，倒置显微镜观察细胞形态并摄影。 CCL－187力人终浓度为 lx 10‘mol／L的 Ro 40－8757处理3在s、12天，并分别设对照组，对照组加等量的DMSO，扫描、透射电镜观察细胞形态并摄影。 单层培养的 CCL－187细胞加人 lx 10－‘mo＊L的 Ro 40－8757培养3在sJ2天后采用流式细胞术测定细胞内 DNA含量。 收集用 lx 10－‘mo＊L Ro40－8757处理 12、24、48、72、144小时及不加药的CCL－187细胞各10’个，提取细胞内蛋白，W＼St－em Blot法测定药物作用前后细胞周期抑制蛋白 PZI和 P27的变化。 ·2· 统计学处理采用 Student’s t检验。 实验结果 MT’f结果表明，RO 40－8757作用后，细胞系出现显著的生长抑制作用，并具有时间、浓度依赖性。不同浓度的 RO 40－8757OX10－‘IX10－‘、3X10－’、IX10－’、3X10－‘皿UL）作用3天、6天J 天和 12 天，CCL－187细胞的存活率分别为 86．5伪－96．9％＼74．7呢一98．8拓、61．3啪－87．4呢、28．2呢一 84．3啪，同一作用时间的不同浓度组之间生长抑制率有显著差异（P＜0．05八药物对CCL－187细胞的生长抑制率随着作用时间的延长而增加，相同浓度6天刀天和12天作用组之间的生长抑制率有显著差异（P＜0．05）。 形态学观察发现，RO 40－8757对 CCL—187细胞的数量的影响与药物的浓度有关。倒置显微镜下观察，可见 3 x 10JmoUL药物处理组细胞数量和形态都和对照组无显著差异，细胞生长良好，铺展正常，未见悬浮细胞增加。3 x 10巧＊ 10‘moUL药物处理组细胞数量明显减少，但贴壁正常，有的细胞形态变圆，未见悬浮细胞增加。透射电镜观察发现，lx 10正moUL药物处理 12天后细胞膜完整，表面微绒毛减少，核膜完整；lx 106mol／L药物作用前，细胞内质网数目较少，分布散乱无规律，呈不规则、不连续的片段状；作用后，内质网数量增多，变长，分布于细胞核周围并铺展于细胞质中。扫描电镜观察发现，加药处理6天后的细胞铺展正常，但是细胞表面突起和伪足明显减少。扫描电镜和透射电镜均未发现加药后的细胞出现凋亡、分化的特征性改变。 流式细胞术进行DNA含量分析结果表明，CCL－187细胞经lx10“‘mol／L的Ro4