肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影响

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目的:检测肺痨康治疗耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中caspase-3、caspase-7和miRNA-29b的表达水平,探讨肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的机制,为中医药治疗耐药肺结核的机制提供新思路。方法:1.SPF级昆明种小鼠尾静脉注射耐异烟肼结核分枝杆菌菌悬液,建立耐异烟肼肺结核小鼠模型,以生理盐水、肺痨康、异烟肼、肺痨康联合异烟肼灌胃56天;尾静脉注射H37RV标准结核分枝杆菌菌悬液,建立肺结核小鼠模型,以生理盐水灌胃56天;另设空白对照组,以生理盐水灌胃56天;2.免疫组化检测各组小鼠肺组织中caspase-3、caspase-7表达水平;3.采用Real time quantity-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)技术检测各组小鼠肺组织中miRNA-29b的表达水平;4.采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行统计学分析。结果:1.空白对照组小鼠肺组织未检测出结核分枝杆菌;耐异烟肼肺结核模型组小鼠、标准菌肺结核模型组小鼠肺组织均检测出结核分枝杆菌。2.根据免疫组化评价标准,与空白对照组小鼠肺组织比较,caspase-3在标准菌肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.05);经过肺痨康干预后,caspase-3的表达高于空白对照组(P<0.05),但比治疗前下降;经过肺痨康联合异烟肼干预后,caspase-3的表达与空白对照组无显著差异(P>0.05);经过异烟肼干预后,caspase-3的表达高于空白对照组(P<0.05)。3.根据免疫组化评价标准,与空白对照组小鼠肺组织比较,caspase-7在标准菌肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.01);经过肺痨康联合异烟肼干预后,caspase-7的表达与空白对照组无显著差异(P>0.05);经过肺痨康干预后,caspase-7的表达与空白对照组无显著差异(P>0.05);经过异烟肼干预后,caspase-7表达与空白对照组无显著差异(P>0.05)。4.在空白对照组小鼠肺组织中,MiRNA-29b的表达最低;与空白对照组比较,MiRNA-29b在标准肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P<0.01),且在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中最高;与耐异烟肼肺结核模型组比较,miRNA-29b的表达在肺痨康干预后降低(P<0.01),在异烟肼干预后降低(P<0.01),在肺痨康联合异烟肼干预后降低(P<0.05),其中肺痨康、肺痨康联合异烟肼干预后,下降幅度大于异烟肼干预后的结果。肺痨康、肺痨康联合异烟肼干预后miRNA-29b的表达相近,且都低于在标准肺结核模型中的表达。结论:1.小鼠尾静脉注射耐异烟肼结核杆菌菌悬液,7天后,小鼠肺组织中检测出结核杆菌,说明这种方法造模可行。2.在耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中,caspase-3的免疫组化染色表达升高,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-3引起的细胞凋亡有关。3.在耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中,caspase-7的免疫组化染色表达升高,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-7导致的细胞凋亡有关。4.MiRNA-29b在耐异烟肼肺结核小鼠模型肺组织中呈高表达,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康抗耐异烟肼肺结核,可能通过miRNA-29b的降低而发挥作用。
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