目的:脂肪干细胞不仅具有促进组织修复与再生的作用,而且具有多向分化潜能,在临床应用中的作用十分广泛。因临床应用的需要,脂肪干细胞常需进行冷冻保存,冷冻保护剂在其中有关键作用。绝大多数的冷冻保护剂(CPA)含有有毒浓度的二甲基亚砜(DMSO),限制了其临床应用。因此,本研究旨在探索一种安全无毒、易洗脱,可适合临床使用的新型CPA,实现脂肪干细胞高效率冻存。方法:通过不同浓度的海藻糖(Tre)(0.3 M,0.6 M,1.0 M,1.25 M)和不同浓度的甘油(Gly)(10%,20%,30%)分别冻存ADSCs。冻存30天后进行ADSCs复苏,通过复苏ADSCs的细胞活性以筛选海藻糖和甘油作为CPA的最优冻存浓度。我们进一步将海藻糖联合甘油应用于ADSCs冻存,与10%DMSO+90%胎牛血清(FBS)组进行比较,检测其冻存效率。主要通过细胞学实验,如CCK8实验、划痕实验、流式细胞实验、三向分化实验,检测实验组复苏ADSCs的细胞增殖迁移能力、多向分化潜力及表面标志表达。将实验组的复苏ADSCs与新鲜ADSCs移植小鼠创面,通过创面愈合的大体观察及组织学分析结果,验证实验组ADSCs的生物学功能。结果:在不同浓度海藻糖和甘油中,1.0 M的海藻糖及20%的甘油组复苏ADSCs的活性最高。应用海藻糖联合甘油(1.0 M Tre+20%Gly)作为CPA冻存ADSCs,冻存效率比单一成分更优,且与10%DMSO+90%FBS组无显著性差异。与10%DMSO+90%FBS组相比,1.0 M Tre+20%Gly组在细胞增殖能力、细胞表面标志物表达及多向分化潜能上均无显著性差异,但其迁移能力更佳(p<0.001)。复苏ADSCs移植创面实验结果表明1.0 M Tre+20%Gly组ADSCs具有与新鲜ADSCs同样的促进创面愈合(p=0.325)、促血管生成能力(p=0.528)。结论:1.0 M Tre+20%Gly作为新型冷冻保护剂,冻存ADSCs具有较好的冻存效率,其不影响复苏后ADSCs的细胞学及生物学功能,且成份均在临床上得以广泛使用,因此此新型CPA适合临床使用。