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以从渤海近海域分离获得能够抑制多种植物病原真菌的Penicillum sp. TS67菌株为实验材料,对其胞外抑菌活性蛋白的分离纯化方法、不同方法的工艺条件进行了优化,同时对粗蛋白的生物活性进行了研究,为该蛋白质结构的确定和功能的进一步开发奠定基础。论文首先在Penicillum sp.TS67抑菌活性测定的基础上,选用硫酸铵盐析法、聚乙二醇成析法、低温乙醇沉淀法和双水相萃取法从原发酵液中初步浓缩活性蛋白质,进行了各种方法的条件摸索和比较,发现硫酸铵盐析法获得的活性蛋白质量和抑菌圈直径明显高于其他方法。活性蛋白质的提取率(沉淀的蛋白量/发酵液的蛋白量)为30%,抑菌圈直径为1.95cm。其次对初步浓缩获得的粗蛋白采用了三种方法脱盐,即SephadexG-25柱脱盐,超滤脱盐和透析袋脱盐。以蛋白的活性大小和抑菌圈直径的大小及脱盐时间的长短为原则,SephadexG-25柱脱盐稍优于透析袋脱盐,超滤脱盐则由于导致活性大大减小而最差。用SephadexG-25柱脱盐后,虽然本实验用的截留分子量为80KD超滤膜截留住了活性蛋白质,但是抑菌圈直径也只有0.9厘米。而SephadexG-75柱分离时只出现了一个峰,没有任何分离效果。SephadexG-100柱分离洗脱出两个蛋白峰,其中只有第一个蛋白峰对植物病原真菌病有拮抗作用。在DEAE-sephadex-A50阴离子交换柱进行层析分离时,获得四个峰,其中第一个峰是活性蛋白峰。经SDS-PAGE电泳鉴定后为电泳纯,分子量约为83KD.电泳纯的抑菌活性茚三酮反应为阳性,苯酚-硫酸法后没有橙黄色出现,且糖蛋白电泳染色法的电泳胶上没有紫红色条带出现。几丁质测定该活性蛋白质,没有发现其有活性。而用β-葡聚糖做底物,反应产物与DNS试剂显色。取硫酸锌和野尻霉素作为β-葡聚糖酶的抑制剂做牛津杯实验时,发现随着抑制剂量的增大,抑菌圈直径明显减少。综上试验结果可以推知,破坏大豆尖孢镰刀菌等植物病原真菌细胞壁的Penicillum sp.TS67胞外代谢产物是β-葡聚糖酶,不是几丁质酶。