【摘 要】
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益生菌是一类当足够量定植于机体肠道或生殖系统内,能改善宿主微生态环境从而发挥其对宿主健康有益功效的活性微生物。其中罗伊氏乳杆菌几乎天然存在于所有脊椎动物和哺乳动物机体肠道内,能够有效的黏附于人体和动物肠道内,调节肠道菌群。促进罗伊氏乳杆菌等乳酸菌增殖的常用方法是添加益生元,常见多为低聚果糖等碳源,目前研究表明具有潜在益生元活性的不同来源的蛋白质及其水解产物也可以促进益生菌的增殖。对于大豆蛋白水解物
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益生菌是一类当足够量定植于机体肠道或生殖系统内,能改善宿主微生态环境从而发挥其对宿主健康有益功效的活性微生物。其中罗伊氏乳杆菌几乎天然存在于所有脊椎动物和哺乳动物机体肠道内,能够有效的黏附于人体和动物肠道内,调节肠道菌群。促进罗伊氏乳杆菌等乳酸菌增殖的常用方法是添加益生元,常见多为低聚果糖等碳源,目前研究表明具有潜在益生元活性的不同来源的蛋白质及其水解产物也可以促进益生菌的增殖。对于大豆蛋白水解物和大豆肽,已有研究证明其可以促进益生菌的生长代谢,但仍存在未考虑胃肠道消化,作用机制存在争议,发挥功效的关键肽段结构不清楚等问题,因此本课题选择大豆蛋白和大豆肽,探究其对罗伊氏乳杆菌的影响及初步的作用机制。首先将大豆蛋白和大豆肽进行体外模拟胃肠道消化,得到消化后的大豆蛋白(dpro)和消化后大豆肽(dpep),通过等氮替换的方式探究大豆蛋白和大豆肽对罗伊氏乳杆菌生长代谢的影响,通过测定生长曲线,活菌数,乳酸含量和乙酸含量并观察其菌体形态,发现罗伊氏乳杆菌LR08利用dpro和dpep后的细胞形态更加短小饱满,dpro和dpep的活菌数较LN组和MRS组在稳定期有显著提高,且dpep组显著高于dpro组,可能与dpep的分子质量较小,易被菌体利用有关。dpep组乳酸含量在对数期前期积累迅速,但12 h未能超过MRS组。将低聚果糖(FOS)和dpep共同培养罗伊氏乳杆菌,发现FOS和dpep两者可以协同作用于罗伊氏乳杆菌LR08,两者共同作用使得16 h活菌数极显著高于对照组,FOS和dpep两者在乙酸含量上也有类似表现。通过转录组学分析发现大豆肽和大豆蛋白对罗伊氏乳杆菌作用表现在能量消耗、ABC转运、脂肪酸合成、氮化合物转运、跨膜运输等,与ATP转运、嘌呤代谢有关的基因表达上调,与氮化合物转运的基因表达下调。最后通过对消化后肽进一步分离,筛选出了促进作用较强的组分1,对其肽段鉴定,找到了其中可能发挥关键作用的肽段ILSP、IQLP、IAANPA、FASPA、IATSPA和IIP。综合以上研究成果,大豆蛋白和大豆肽都能促进罗伊氏乳杆菌的生长和代谢,并且与FOS发挥协同作用;同时通过影响罗伊氏乳杆菌的转运系统,能量代谢来促进其对大豆蛋白和大豆肽的利用,此外,鉴定出多条与促罗伊氏乳杆菌生长相关的全新结构的肽段,这为探究益生菌代谢蛋白的机制提供理论基础。
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