第一部分脆弱拟杆菌在NEC小鼠模型中的作用目的:新生儿坏死性小肠结肠炎(Necrotizing enterocolitis,NEC)是新生儿的危重症,尤其好发于早产儿。病重者往往需要手术治疗,幸存者可能伴随短肠综合症、胆汁淤积、神经系统发育障碍等后遗症。国内外研究发现,NEC患儿肠道中脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis,B.fragilis)的比重明显低于正常患儿。本研究通过脆弱拟杆菌干预及建立NEC模型,探讨脆弱拟杆菌在NEC的发生中的作用。方法:60只新生3天的健康C57BL/6小鼠分别给予PBS和脆弱拟杆菌灌胃处理,连续7天。10日龄的小鼠通过连续3天的缺氧、冷刺激、配方奶喂养的方式建立NEC模型。小鼠在建模第4天时被处死。HE染色观察小鼠回盲部肠组织病理改变;实时荧光定量q PCR检测IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1基因表达水平;ELISA检测肠组织匀浆上清液IL-10、TGF-β1蛋白水平;采用流式细胞技术分析肠道固有层调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)占CD4+T细胞比例。结果:与PBS组相比,脆弱拟杆菌组新生鼠体重下降少,肠黏膜病理损伤轻;肠组织q PCR结果显示脆弱拟杆菌组IL-1β、IL-6基因表达较低(P<0.05),IL-10基因表达较高(P<0.05);肠组织ELISA结果显示脆弱拟杆菌组IL-10表达较高(P<0.05);流式细胞技术分析结果提示:脆弱拟杆菌组肠道固有层调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)占CD4+T细胞比例较PBS组高(P<0.05)。结论:脆弱拟杆菌在新生儿坏死性小肠结肠炎中起保护作用,其机制可能与促进Treg细胞的分化,上调细胞因子IL-10的表达有关。第二部分轻型链球菌在铜绿假单胞菌感染中的作用目的:铜绿假单胞菌和轻型链球菌是机械通气患儿的气管导管表面常见微生物。本课题组前期发现,TLR4在轻型链球菌和铜绿假单胞菌混合感染中发挥了重要作用。而TLR2也是肺组织中识别病原菌并激活机体产生免疫应答的重要受体。本研究目的在于探讨TLR2在铜绿假单胞菌和轻型链球菌混合感染中的作用。方法:将野生型C57/BL6和TLR2-/-小鼠随机分为4组:PBS组,单独轻型链球菌组、单独铜绿假单胞菌组、铜绿假单胞菌+轻型链球菌组。通过肺组织病理学分析、肺泡灌洗液总细胞计数、中性粒细胞计数及炎症因子IL-6、TNF-α的检测,观察各组小鼠的炎症反应。结果:野生型C57/BL6小鼠中,单独铜绿假单胞菌组小鼠肺组织炎症反应剧烈,肺泡间隔增宽明显,且肺泡灌洗液细胞总数、中性粒细胞计数及IL-6、TNF-α的表达明显升高(P<0.05)。铜绿假单胞菌+轻型链球菌组小鼠肺泡间隔增厚稍轻,且肺泡灌洗液细胞总数、中性粒细胞计数及IL-6、TNF-α的表达减轻。在TLR2基因缺陷小鼠中,单独铜绿假单胞菌组和铜绿假单胞菌+轻型链球菌组小鼠肺泡间隔均有增厚,肺泡灌洗液细胞总数、中性粒细胞计数及IL-6、TNF-α的也明显升高,两组表达没有统计学差异。结论:轻型链球菌在与铜绿假单胞菌混合感染时,有减轻炎症反应的作用,轻型链球菌减低炎症反应的机制与TLR2有关。