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目的:探讨RCA-TERT-Ad35靶向抑制干细胞样乳腺癌细胞,为临床治疗乳腺癌提供理论依据。方法:1.乳腺癌细胞株MCF-7通过悬浮培养方法进行传代培养,形成MCF-7微球细胞。RT-PCR方法检测hTERTmRNA在MCF-7细胞及MCF-7微球细胞中的表达情况。2.MTT实验检测经紫杉醇不同药物浓度处理后MCF-7微球细胞株观察组及对照组MCF-7细胞株生存率。3.三种非复制型病毒RIA-LACZ,RIA-LACZ-RGD及RIA-LACZ-Ad35 在浓度递增下(MOIs 0,0.2,1,5,20,100)分别对 MCF-7 细胞株和MCF-7微球细胞株进行体外转染实验。48小时后进行β-半乳糖苷酶染色,评估三种病毒在不同的细胞和不同浓度下的转染率。4.RCA-TERT-Ad35观察组及RCA-Ad35对照组分别感染MCF-7细胞,孵化7天后MTT液处理MCF-7细胞株。检测两种病毒对细胞的杀伤作用。5.体外溶瘤实验:三种细胞株(MCF-7,MCF-7微球细胞及紫杉醇耐药HG细胞),每种细胞均等分成4份。三种病毒均接受4组可复制型溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35组,RCA-Ad35组,WT-Ad5组(野生型)及空白对照组的处理。4天后,用结晶紫试剂评估每组病毒在不同细胞株的杀伤能力。6.小鼠移植瘤模型中,取4周小鼠,肿瘤体积在100 mm3,随机分为3组,每组六个小鼠。RCA-Ad35组和RCA-TERT-Ad35组,PBS组每隔2天被注射肿瘤内。结果:1.hTERTmRNA在MCF-7微球细胞株中表达远远高于MCF-7细胞株,MCF-7微球细胞株在传代培养中,hTERTmRNA也稳定高表达。2.MCF-7微球细胞株相对于MCF-7细胞株对紫杉醇化疗药物更有抵抗性。3.体外转导MCF-7细胞株和MCF-7微球细胞株实验RIA-LACZ-Ad35组的较RIA-LACZ-RGD组-7和RIA-LACZ组有较强的转导率,且倾向于转导如MCF-7微球细胞株。溶瘤实验示RCA-TERT-Ad35组较RCA-Ad35组对MCF-7细胞株有较强的杀伤力。4.在多细胞株溶瘤实验中RCA-TERT-Ad35 组较 WT-Ad5 组、RCA-Ad35 组在多种细胞(MCF-7 细胞株、MCF-7微球细胞株、HG-紫杉醇耐药细胞株)均表现最强的溶瘤作用。5.体外动物实验中再次证明RCA-TERT-Ad35组较RCA-Ad35组有较强的肿瘤抑制作用。结论:1.溶瘤腺病毒RCA-TERT-Ad35在体内、外有抑制伤干细胞样乳腺癌的增殖。2.为乳腺癌的基因治疗提供理论依据。