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乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,世界范围内其死亡率位居第一位。依椐乳腺癌雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(progesteronereceptor,PR)和人表皮生长因子受体 2(Human epidermal growth factor receptor type 2,HER-2)表达水平,将其分为Luminal A型、Luminal B型、HER-2阳性型、三阴性这四个亚型。其中,三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancer,TNBC)约占所有乳腺癌的15%,但其复发转移能力强,临床治疗应答率低,患者预后一直未有显著改善。因此,深入探索驱动TNBC转移的关键节点分子,阐明其调控网络,对于寻找有效的治疗靶点,提高患者的生存时间具有重要的意义。课题组致力于研究环境应答基因JWA与肿瘤发生发展的关系,既往研究发现JWA通过MAPK等信号通路抑制黑色素瘤、食管癌、肝癌和胃癌等多种肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。本研究旨在探讨JWA抑制TNBC转移的分子机制及其调控的下游关键分子。方法:在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231与MDA-MB-468中,上调或干涉JWA的表达,采用划痕实验、transwell小室迁移实验考察TNBC乳腺癌细胞迁移能力;用Western blot、RT-PCR等技术探寻JWA对CXCR4表达和对p-AKT的激活情况的影响;然后共上调或共干涉JWA及CXCR4后,用Western blot和transwell小室迁移实验观察CXCR4逆转JWA对三阴性乳腺癌细胞转移的影响;在新鲜的三阴性乳腺癌及癌旁组织中,Western blot检测JWA、CXCR4的表达量。结果:(1)JWA抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移。transwell小室迁移实验证明,高表达JWA后,三阴性乳腺癌细胞的迁移能力减弱,统计结果显示P<0.05,而干涉JWA表达后,三阴性乳腺癌细胞的迁移能力增加,统计结果显示P<0.01;划痕实验也得到相似的结果:高表达JWA后,经过36 h MDA-MB-231细胞划痕宽度由对照的40%增加到65%,低表达JWA后,经过48 h MDA-MB-468细胞划痕宽度由对照的75%减少为55%。而JWA的表达对两株细胞增殖无影响。(2)JWA抑制三阴性乳腺癌细胞中CXCR4蛋白的表达。在三阴性乳腺癌细胞中,JWA负调节CXCR4和p-AKT。低表达CXCR4后,降低p-AKT活性,高表达CXCR4后,增加p-AKT活性,但是高低表达CXCR4对JWA蛋白表达没有影响。(3)JWA通过负调控CXCR4抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移。共转染高表达JWA及CXCR4质粒,可以逆转高表达JWA后引起的p-AKT活性的降低,Transwell实验显示:细胞迁移能力恢复;在干涉JWA表达细胞中共干涉CXCR4,可以逆转低表达JWA后引起的p-AKT活性的增强,细胞迀移能力增强亦能被逆转。在干涉JWA表达的MDA-MB-468细胞中加入CXCR4的抑制剂,也得到了相似的结果。(4)JWA通过泛素蛋白酶体系统抑制CXCR4蛋白的表达。RT-PCR实验证明高低表达JWA后CXCR4的mRNA表达水平无明显变化。三阴性乳腺癌细胞中高表达JWA后可以加快CXCR4的蛋白降解,低表达JWA可以抑制CXCR4的蛋白降解,泛素蛋白酶体特异性抑制剂PS341可以抑制JWA对CXCR4蛋白表达的影响。(5)三阴性乳腺癌组织中JWA及CXCR4的表达。6对新鲜的三阴性乳腺癌和癌旁组织结果显示,与癌旁组织相比,JWA在癌组织中均呈低表达,而CXCR4在癌组织中均呈高表达。结论:综上所述,在三阴性乳腺癌组织中低表达JWA,而JWA能通过泛素蛋白酶体系负性调节CXCR4的蛋白表达从而抑制三阴性乳腺癌的转移。这些研究结果也提示我们JWA不仅可能是三阴性乳腺癌的预后标志物,也有可能有望成为抑制三阴性乳腺癌转移的潜在治疗靶点。