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目的:观察经验方三黄益肾胶囊对糖尿病早期肾病大鼠的干预作用,探讨其可能的作用机制,为防治糖尿病肾病提供可靠的实验依据。
方法:将SD大鼠70只,随机分为正常对照组10只,造模组60只。造模组大鼠禁食12小时后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立早期糖尿病肾病大鼠模型。72h后,尾静脉取血测血糖,血糖值≥16.7 mmol/L,确定为糖尿病大鼠。造模成功大鼠52只随机分为4组:模型对照组、三黄益肾低剂量治疗组[0.4 g/(kg·d)]、中剂量治疗组[0.8 g/(kg·d)]、高剂量治疗组[1.6 g/(kg·d)]各13只。中药治疗组在成模后一周开始给予不同剂量的三黄益肾胶囊混悬液灌胃,其余两组灌服相应容量(10 mL/kg)的纯净水,1次/d,连续8周。试验期间,大鼠自由进食水。给药8周末,尾静脉取血测血糖,麻醉大鼠,腹主动脉采血,收集血标本。全自动生化分析仪检测肌酐、尿素氮、胆固醇、甘油三酯。大鼠取血后取双肾,去除肾包膜及肾门结缔组织并用生理盐水洗净后称肾重,得出肾重/体重指数(肾重/体重比值×1000)。右肾10%福尔马林固定,免疫组化法检测转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)。计量资料采用x±s表示,组间比较采用方差分析,自身前后对照比较应用配对t检验。率的对比采用x2检验。数据统计采用SPSS12.0软件系统处理。
结果:1.治疗前造模各组大鼠血糖与正常组比较,均明显升高(P<0.01),而造模各组间血糖差异无统计学意义(P>0.05)。经灌胃治疗8周后,模型对照组及三黄益肾低、中、高剂量治疗组治疗前后血糖相比变化无明显差异(P>0.05)。模型对照组及三黄益肾低、中、高剂量治疗组组间对比变化无明显差异(P>0.05)。2.8周后,各造模组大鼠与正常对照组比较,体质量减轻、肾质量/体质量比值增加,血清肌酐、尿素氮、甘油三酯水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。三黄益肾中、高剂量治疗组与糖尿病模型对照组比较,体重无明显差异(P>0.05),肾重/体重比值明显减少(P<0.01);血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.01或P<0.05)。三黄益肾低剂量治疗组与糖尿病模型对照组比较,体重、肾重/体重比值、血清肌酐、尿素氮、甘油三酯、胆固醇水平无明显差异(P>0.05)。三黄益肾低剂量治疗组与三黄益肾中、高剂量治疗组对比,肾重/体重比值、血清肌酐、尿素氮水平有明显差异(P<0.01)。三黄益肾中、高剂量治疗组间对比,体重、肾重/体重比值、血清肌酐、尿素氮、甘油三酯、胆固醇水平无明显差异(P>0.05)。3. TGF-β1、VEGF在正常对照组大鼠肾组织有少量表达,其阳性表达率分别为10%和20%,明显低于糖尿病模型对照组和三黄益肾胶囊低剂量治疗组(P<0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组肾组织中TGF-β1及VEGF的表达低于糖尿病模型对照组(P<0.05),而与正常对照组无明显差异(P>0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组之间TGF-β1、VEGF表达无明显差异(P>0.05)。三黄益肾胶囊低剂量治疗组TGF-β1、VEGF的表达与糖尿病模型对照组对比无明显差异(P>0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组肾组织中VEGF的表达低于三黄益肾胶囊低剂量治疗组(P<0.05)。
结论:1、本研究复制的糖尿病大鼠模型经过9周后存在肾脏损害。2、三黄益肾胶囊无减轻糖脂代谢紊乱的作用。3、三黄益肾胶囊能够减轻糖尿病大鼠肾脏的肥大,降低血尿素氮、肌酐水平。4、正常对照组大鼠肾脏有少量TGF-β1和VEGF表达,糖尿病模型对照组大鼠肾脏TGF-β1和VEGF表达明显增强(P<0.05)。5、三黄益肾胶囊能够抑制TGF-β1、VEGF在肾脏的表达。6、本研究表明三黄益肾胶囊可能部分通过以上机制延缓糖尿病大鼠的肾损伤。