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冠状动脉支架术后再狭窄一直是限制其远期疗效的最大难题,药物涂层支架技术可以将再狭窄率降至10%左右,但还未在根本意义上消除再狭窄的发生。了解血管损伤后再狭窄的基因调控机制可能是最终解决这个难题的关键之一大多数学者认为血管球囊损伤后再狭窄是由于中膜平滑肌增生、迁移并分泌大量细胞外基质形成增厚的新生内膜所造成的。在这个过程中,血管壁细胞及血液成分通过自分泌、旁分泌等形式共同参与了平滑肌细胞的增生迁移和转型。实验研究提示,利用抑制平滑肌细胞增殖的某些药物确实可以减轻血管成形术后再狭窄的程度。关于Wnt信号通路在血管再狭窄中的调控作用是一新的研究领域,虽然有研究提示Wnt信号通路可能参与了血管受损伤后平滑肌细胞的增殖,但其证据还不充分,且缺乏在体研究的资料。在血管损伤内膜修复的过程中,炎症反应是一个必经的环节,而某些中药成分,如大黄素等具有抗炎的作用,这些中药成分是否具有预防血管损伤后狭窄的作用及作用的机制还不清楚。本研究的目的：(1)为解决血管再狭窄这一难题提供新的治疗靶点,(2)并为中药在这一领域的深入研究和开发提供新的思路和资料。第一部分Wnt信号通路在AngⅡ诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖及胶原分泌中的作用实验分为7组：空白对照组,AngⅡ(10-6mol/L)组,AngⅡ+阿托伐他汀0.1umol/L组,AngⅡ+阿托伐他汀1umol/L组,AngⅡ+阿托伐他汀10umol／L组AngⅡ+SiRNA-dvl-1组,AngⅡ+SiRNA-dvl-1+阿托伐他汀10umol／L组；MTT实验增加阿托伐他汀0.1、1、10umol／L组。结果显示：(1)SiRNA-dvl-1引起转录后基因沉默后,AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖被显著抑制；1umol/L浓度阿托伐他汀对正常培养的血管平滑肌细胞无增殖抑制作用,但可明显抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖(P<0.05),阿托伐他呈时间和浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞的增殖；(2)AngⅡ可诱导血管平滑肌细胞Wnt4、Dvl-1、β-catenin的mRNA和蛋白的高表达,用SiRNA沉默dvl-1基因则可显著逆转AngⅡ诱导的Dvl-1、β-catenin的高表达,阿托伐他汀(1、10umol/L)呈浓度依赖地抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞Wnt4、Dvl-1、β-catenin的高表达；(3)SiRNA-dvl-1及阿托伐他汀(1、10umol/L)可显著抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞Col-1、Col-3的mRNA和蛋白的高表达。以上结果表明：1)AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖时,胞内Wnt通路信号分子呈高表达；2)当SiRNA-dvl-1及阿托伐他汀抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖时,胞内wnt通路信号分子的表达均显著降低；3)AngⅡ诱导血管平滑肌细胞胶原基因的高表达与胞内Wnt通路的激活有关。结论：Wnt信号通路参与了AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖。第二部分Wnt信号通路在球囊损伤后大鼠颈动脉的表达建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,分为假手术组,模型组,他汀干预组。结果显示：(1)大鼠颈动脉球囊损伤后6周,损伤段血管内膜增厚明显,与假手术组比较,内膜／中膜厚度比显著增加(P<0.05),内膜胶原含量显著增加(P<0.05)；与模型组比较,他汀组的内膜／中膜厚度比下降(P<0.05),内膜胶原含量减少(P<0.05)；(2)免疫组化染色示模型组损伤段血管内膜中膜Wnt4、dvl-1、 β-catenin表达增加,而他汀组上述信号分子表达减少；(3)动脉损伤组织的Wnt4、 dvl-1、β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平显著增高,而他汀干预组的表达明显减少；(4)模型组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达水平明显高于他汀组。上述结果表明：1)在体颈动脉损伤后的病理改变与Wnt信号分子的表达水平相关；2)阿托伐他汀可减轻在体颈动脉损伤后的病理改变,并伴有Wnt信号分子表达的降低；3)在体颈动脉损伤后Ⅰ型及Ⅲ胶原的合成、分泌也与Wnt通路信号分子的表达有关。结论：Wnt信号通路参与了在体颈动脉球囊损伤后的病理改变第三部分大黄素预防动脉损伤后再狭窄作用及机制探讨体外细胞实验实验分组：正常对照组,AngⅡ组,大黄素组,AngⅡ+大黄素组,AngⅡ+SiRNA组,AngⅡ+SiRNA+大黄素组。结果显示：(1)大黄素可浓度依赖性地抑制AngⅡ刺激所致的血管平滑肌细胞的增殖；(2)抑制平滑肌细胞增殖的浓度的大黄素可明显下调AngⅡ诱导的Wnt4、 Dvl-1、β-catenin、Cyclin-D1的mRNA及蛋白的高表达；(3)大黄素可明显下调AngⅡ诱导的Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白的高表达。在体实验建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,分为假手术组,模型组,大黄素(灌胃)干预组。结果显示：(1)与模型组比较,大黄素组内膜增生减轻,内皮层相对平整；新生内膜面积、内膜厚度、内膜/中膜面积比均减少(P<0.05)；(2)免疫组化染色示血管损伤处的Wnt4、Dvl-1、β-catenin以及Col-1、Col-3的表达较模型组下降(P<0.05)；(3)动脉损伤处的wnt4、Dvl-1、β-catenin、CyclinD1及Col-1、Col-3的蛋白表达低于模型组；(4)苦味酸天狼星红胶原特异染色显示大黄素组胶原容积积分(collagen volume fraction, CVF)减少。上述结果表明：1)大黄素可通过下调wnt信号通路抑制血管平滑肌细胞的增殖；2)大黄素可通过下调wnt信号通路减少血管平滑肌细胞胶原的合成和分泌。结论：大黄素可减轻颈动脉球囊损伤后再狭窄的病理改变