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目的:设计并构建基质金属蛋白酶MMP-2特异性荧光分子探针,初步开展分子影像技术在体外结直肠癌组织的快速、准确性检测研究。方法:利用基质金属蛋白酶MMP-2特异性识别的多肽底物,通过一价铜离子催化的“点击”化学和酰胺化反应分别将叠氮异硫氰酸荧光素(FITC-N3)和荧光淬灭基团Dabcyl-NHS偶联于多肽底物两端制备得到MMP-2特异性识别的荧光分子探针Dab-GPLGVRGY-FITC。分子探针与重组MMP-2、Furin、DNase等溶液作用后,检测溶液在520 nm处荧光信号变化情况,对探针的特异性和检测灵敏度进行评估。并利用MTT法,对该分子探针的细胞毒性进行初步评估。随后,将人源性结肠癌细胞Lo Vo和正常胃粘膜上皮细胞GES-1与该分子探针进行孵育并利用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。最后,将15例临床结直肠癌和癌旁组织与分子探针进行反应,并通过荧光光谱仪检测及荧光共聚焦显微镜成像观察对结直肠癌和癌旁组织进行区分。结果:1、多肽底物(GPLGVRGY-Pra)、叠氮异硫氰酸荧光素(FITC-N3)和Dabcyl琥珀酰亚胺脂(DABCYL acid,SE)经化学反应偶联制备得到分子探针Dab-PLGVRGY-FITC,并经高分辨质谱确证。2、分子探针Dab-PLGVRGY-FITC与重组MMP-2作用后,荧光信号明显增强,且荧光强度随着MMP-2用量的增加呈线性增强,且与Furin、DNase、RNase、BSA、MMP-2等生物酶作用后,仅MMP-2出现明显的荧光信号变化。3、MTT实验显示该分子探针对细胞具有较低的毒性,能应用于活细胞成像研究。Lo Vo和GES-1细胞与分子探针孵育后,经荧光共聚焦显微镜进行成像观察,Lo Vo细胞表现出较强的绿色荧光,而GES-1细胞几乎无荧光信号显示。4、临床结直肠癌、癌旁组织与分子探针作用后,经荧光光谱仪检测及荧光共聚焦显微镜成像观察,结直肠癌组织荧光信号均明显强于癌旁组织。结论:本研究设计并构建了一种新型的能被MMP-2特异性识别的荧光分子探针Dab-PLGVRGY-FITC。该分子探针对MMP-2的检测具有较高的灵敏度和较强的特异性,且其细胞毒性较小。该分子探针不仅能对MMP-2过表达的人源性结肠癌细胞Lo Vo特异性成像,还能对临床结直肠癌及癌旁组织进行成像区分。