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目的：人根尖乳头细胞具有矿化潜能,它在年轻恒牙牙根的发育过程中发挥重要作用。基于基因转染条件下该细胞的体外矿化能力的改变及体内牙本质样结构的形成情况少有文献报道。本研究构建人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)真核表达质粒pcDNA3.1hisA-VEGF165;探讨人根尖乳头细胞转染pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1后其矿化相关因子的表达；研究pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1稳定转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)后持续分泌的VEGF165和TGFβ1蛋白对体内牙本质样组织形成的影响。方法：提取脐静脉内皮细胞(ECV304)总RNA,逆转录聚合酶链反应(reverse-transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)扩增VEGF165基因,插入pcDNA3.1hisA,构建重组质粒pcDNA3.1hisA-VEGF165,经酶切及测序验证正确后,将其和pcDNA3.1hisA-TGFβ1转染人根尖乳头细胞,采用实时定量PCR (real-time PCR)检测转染效率和骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1, DMP1)的表达。脂质体介导pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1转染CHO细胞,G418筛选稳定表达的细胞, RT-PCR检测转染后的CHO细胞中VEGF165和TGFβ1mRNA的表达,ELISA法检测转染后上清中VEGF和TGFβ1蛋白的表达水平,接种转染后的CHO细胞至胶原膜,选择24只wistar大鼠双侧上颌第一磨牙为实验牙,将各组接种有细胞的胶原膜置于人工穿髓孔处,ChemFlex充填窝洞。实验随机分为以下几组：(1)直接ChemFlex充填；(2)含正常CHO细胞的胶原膜+ChemFlex充填；(3)含转染pcDNA3.1hisA细胞的胶原膜+ChemFlex充填；(4)含转染pcDNA3.1hisA-VEGF165细胞的胶原膜+ChemFlex充填；(5)含转染pcDNA3.1hisA-TGFβ1细胞的胶原膜+ChemFlex充填；(6)含转染pcDNA3.1hisA-VEGF165细胞和pcDNA3.1hisA-TGFβ1细胞的胶原膜+ChemFlex充填。8周后处死动物,分离实验牙,10%中性福尔马林溶液固定6d,流水冲洗24h,逐级用70、90、95和100%酒精脱水,氯仿透明96h,浸泡液浸泡,树脂包埋,制备硬组织切片,甲苯胺蓝染色。采用SPSS17.0软件对实验数据进行统计学分析,p<0.05表示差异具有统计学意义。结果：插入表达载体的VEGF165基因序列与GenBank数据库中的序列具有100%同源性。体外成功分离培养人根尖乳头细胞,细胞呈长梭形。转染VEGF165和TGFβ1的根尖乳头细胞其VEGF165和TGFβ1mRNA水平显著升高；各实验组DSPP mRNA的表达均升高(p<0.05),转染pcDNA3.1hisA-TGFβ1和共转染组的OCN mRNA升高(p<0.05),BSP mRNA无明显差异(p>0.05),DMP1mRNA均降为0。RT-PCR和ELISA结果显示CHO细胞转染后VEGF65和TGFβ1基因和蛋白稳定表达。甲苯胺蓝染色显示转染pcDNA3.1hisA-VEGF165的CHO组中穿髓孔下方见毛细血管明显充血及炎症细胞浸润现象,未见硬组织形成；转染pcDNA3.1hisA-TGFβ1的CHO组中穿髓孔下方可见少量深染矿化团块,周围见增生的牙髓成纤维细胞,偶见炎症细胞浸润,未见管状牙本质形成；转染pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1的两种CHO组中穿髓孔下方可见大量深染矿化团块,几乎完全封闭穿髓孔,未见结构规则的牙本质桥形成,团块下端成牙本质细胞呈柱状整齐排列；对照组未见硬组织形成。结论：成功构建VEGF165真核表达载体,过表达VEGF165和TGFβ1均能促进人根尖乳头细胞多种矿化因子的表达,可能与根尖乳头细胞的分化相关。TGFβ1能促进体内矿化组织形成,VEGF165和TGFβ1共同作用能更好地促进体内矿化组织形成。