论文部分内容阅读
两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)为菊科(Compositae)金鸡菊属(Coreopsis)一年生草本植物,全草名为蛇目菊,其干燥头状花序称为雪菊,《新疆植物志》中记载雪菊的维吾尔语名为“古里恰依”(Gulqai)(意为“花茶”)。新疆地区称之为雪菊、昆仑雪菊、天山雪菊等。具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功效,是目前在新疆地区唯一与雪莲这一名贵野生药材相齐名的稀有野生植物药材。现代药理学研究表明,两色金鸡菊中含有大量的黄酮类、挥发油、聚炔苷类等成分,具有明显的降血糖、降血压、降血脂、抗氧化等药理活性。经系统的化学成分研究,本课题组首次在两色金鸡菊中发现了聚炔类化合物,且通过COX-2体外活性实验筛选,发现聚炔类化合物具有非常显著的抗炎活性,而炎症恰恰是动脉粥样硬化斑块形成的重要原因,因此推测,两色金鸡菊中聚炔类物质很可能是其防治心血管疾病作用的物质基础。但迄今为止,尚缺乏对两色金鸡菊聚炔有效部位的化学研究,因此本课题对两色金鸡菊头状花序的聚炔部位进行富集并对其化学表征进行研究,主要包括以下五个方面的内容:1.本研究采用单因素法结合正交试验法对两色金鸡菊头状花序药材提取工艺及聚炔有效部位的富集工艺进行考察和筛选,建立了两色金鸡菊头状花序提取工艺及聚炔部位的富集工艺。两色金鸡菊头状花序药材的最佳提取工艺为:取适量两色金鸡菊头状花序药材,粉碎过二号筛,置于蒸发皿中,加入2倍量50%乙醇溶液浸润,搅拌均匀,密闭放置2h,后层层铺平装入渗漉器中,再加入40倍量50%乙醇溶液,浸泡24h后开始渗漉,流速为3mL/min。聚炔部位最佳富集工艺为:采用AB-8大孔树脂柱色谱富集聚炔部位,最大上样量为3.5BV比重为0.128g/mL的原药材提取液,洗脱溶剂为90%甲醇,装柱径高比为1:10,洗脱流速为3BV/h。2.本研究采用常压柱色谱法结合半制备型高效液相色谱法对两色金鸡菊头状花序中主要的聚炔类成分进行分离及纯化,最终分离得到雪菊中6个聚炔类成分:(3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-β-D-葡萄糖苷,金鸡菊炔苷A,(E)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇,(Z)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇,(2S)-(3Z,11E)-二烯-5,7,9-三炔-1,2-十三碳二醇,(2R)-(3E,5E,11E)-三烯-7,9-二炔-1,2-十三碳二醇。其中,(3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-β-D-葡萄糖苷为新化合物,(E)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇和(2S)-(3Z,11E)-二烯-5,7,9-三炔-1,2-十三碳二醇为首次从两色金鸡菊中得到。3.本研究采用HPLC技术对两色金鸡菊头状花序中聚炔部位的成分进行归属和定量研究,建立了聚炔部位的HPLC指纹图谱,归属了金鸡菊炔苷A、 (3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-β-D-葡萄糖苷和(E)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇等3个主要色谱峰,同时测定了3个主要成分在聚炔部位中的含量,分别为0.2439 mg/mg、0.070 mg/mg、0.0068 mg/mg。4.本研究考察聚炔部位对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用LPS诱导的BV-2细胞NO生成模型对分离得到的聚炔类物质金鸡菊炔苷A和(3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-p-D-葡萄糖苷进行抗炎活性筛选,明确成分活性。