小儿肾母细胞瘤免疫治疗的初步研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zz9506018
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:对小儿肾母细胞瘤新型疫苗进行初步探索、研究,为小儿肾母细胞瘤的治疗以及替代手术后放、化疗提供新的切入点。方法:首先对必需的实验材料进行制备和验证,包括抗体的制备和肿瘤细胞模型的建立。针对小儿肾母细胞瘤WT1基因,选取三段抗原表位肽HLA-A*0201、HLA-A*2402以及经过修饰的HLA-A*2402(命名为HLA-A*2402x),采用短肽合成及Balb/c小鼠免疫检测的方法筛选最佳的抗原表位肽,为小儿肾母细胞瘤新型疫苗的研究奠定基础。用筛选得到的表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x分别构建DNA疫苗,为最终研制新型疫苗作对照。采用基因重组技术分别将克隆编码的小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x融合到乙型肝炎核蛋白基因片段(HBc)上,运用棒状杆菌表达系统对融合蛋白进行表达,通过电镜观察到的融合蛋白呈病毒样颗粒(VLP)。继而采用免疫荧光技术和WB技术对表达的蛋白进行鉴定。将鉴定好的VLP蛋白和DNA疫苗应用于细胞模型进行研究,然后,分别免疫Balb/c小鼠,采用ELISA、FCM、MTT等免疫学实验技术分别检测,初步判断基于WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x构建的以VLP为呈现载体的重组蛋白,应用于治疗小儿肾母细胞瘤以及探讨替代手术后放、化疗的可行性。结果:(1)制备完成合格的实验材料:对小儿肾母细胞瘤细胞进行了成功的原代培养,建立了细胞系用于实验研究;克隆了WT1基因部分片段的原核表达质粒,表达并纯化了蛋白,免疫家兔,采集血清制备了针对WT1的多克隆抗体。(2)MTS及FCM初步证明,合成短肽HLA-A*2402,HLA-A*2402x在刺激淋巴细胞增殖方面优于HLA-A*0201,而前两者无显著性差异(p>0.05)。因此,我们选择HLA-A*2402,HLA-A*2402x作为进一步研究的对象。(3)构建了含有HLA-A*2402,HLA-A*2402x的两种DNA疫苗,双酶切及测序结果证明构建成功。(4)在HBc与HLA-A*2402,HLA-A*2402x偶联(couple)基础上,构建完成以VLP为呈现载体的新型疫苗,双酶切和测序结果证明构建成功。成功运用棒状杆菌表达系统对偶联蛋白进行表达,并得到WB和电镜检测证实。(5)运用以VLP为呈现载体的新型疫苗免疫Balb/c小鼠,并以构建的DNA疫苗作为对照,结果表明以VLP为呈现载体的新型疫苗免疫小鼠产生了有效的特异性体液免疫和细胞免疫。抗体亚型分类表明特异性IgG1/IgG2a小于1,说明产生了Th1型为主的免疫应答。T淋巴细胞增殖试验证实免疫小鼠脾脏T淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应增强;ELISPOT分析表明疫苗免疫组的特异性活化的可分泌IFN-γ的CD8~+T细胞数显著多于对照组;FCM检测表明,疫苗免疫组的CD4~+/CD8~+比值显著低于对照组。这些结果提示以VLP为呈现载体的新型疫苗诱导了特异性CD8~+T淋巴细胞应答,所激发的细胞免疫和体液免疫均明显优于DNA疫苗对照组。结论:所制备的小儿肾母细胞瘤以VLP为呈现载体的新型疫苗在小鼠体内可同时激发体液免疫和细胞免疫,优于相应的DNA疫苗,为小儿肾母细胞瘤的免疫治疗提供了新的方法和思路。更为重要的是能将病毒有关成分引入到小儿肾母细胞瘤的免疫治疗。
其他文献
膀胱发生先天畸形、后天损伤或肿瘤时,往往需要重建修复手术,才能恢复膀胱的结构和功能。在膀胱重建修复术中,人们常用胃肠道作为重建修复材料,但会产生多种并发症,如酸碱代
目的分析认知负荷对老年脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)患者书写及绘画流畅性的影响。方法选择2018年11月~2019年5月解放军总医院第七医学中心神经内科就诊
高职高专院校的学前教育专业扩大招生规模后,在人才培养的过程中出现了实践基地建设与发展的"量"与"质"失衡的问题,表现为校内校外实践基地的生均占有量低、实践教学体系不完
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升.在欧美国家,乳腺癌占女性恶性肿瘤的25%~30%.在我国许多大城市,乳腺癌发病率已经上升为女性恶性肿瘤的第一位,成为妇女健
期刊
本研究应用实时荧光定量PCR检测方法成功检测到。肾移植患者体内BK病毒DNA。将一段化学合成的核苷酸链采用基因克隆方法构建外标准品;本方法应用TaqMan荧光探针技术,灵敏度、特
<正>《社区矫正实施办法》规定:"有劳动能力的社区矫正人员应当参加社区服务,修复社会关系,培养社会责任感、集体观念和纪律意识。社区矫正人员每月参加社区服务时间不少于八
目的探讨利用血小板参数和中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)预测早期急性脑梗死严重程度。方法回顾性分析2017年7月~2019年1月空军特色医学中心急诊科就诊的急性脑梗死患者135
在机械加工的过程中,误差的产生是影响机械加工精度的一个关键性因素,虽然在机械加工的实践中误差是无法避免的,但是可以将误差控制在一个合理的范围内,使其不会影响到加工的精度
研究目的目前治疗后尿道狭窄方法较多,但效果不一,与受伤时损伤及其以后狭窄的程度有关。后尿道狭窄手术治疗恢复时间长,容易出现再狭窄、尿道皮肤瘘等并发症。而术前正确的
肾癌是泌尿系肿瘤中仅次于膀胱癌位于第二位,而肾透明细胞癌占肾癌组织类型的78%。目前估计全世界肾癌发病率每年增加2%,全世界每年死于肾癌者近100,000例。近半数的肾癌患者