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目的:通过观察自拟菖蒲郁金汤对多发性抽动症(TS)模型大鼠脑组织和血浆单胺类神经递质含量及纹状体多巴胺(DA)系统蛋白和m RNA的表达、神经细胞的影响,分析自拟菖蒲郁金汤对TS模型大鼠单胺类神经递质及DA系统的作用机理,探讨其治疗TS的分子生物学机制,为临床使用自拟菖蒲郁金汤治疗TS提供理论基础,并为临床治疗TS开拓新的治疗思路。方法:先将90只大鼠随机分为空白组15只,造模组75只,造模组大鼠腹腔注射亚氨基二丙腈(IDPN),剂量为350mg/(kg·d),空白组给予等体积生理盐水腹腔注射,均为每天1次,持续7d。造模完第2天,造模组大鼠均出现不同程度的刻板行为及运动行为,评分均≥2分,表明造模成功。将造模组大鼠再次随机分为模型组、泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高、中、低剂量组,各15只。造模成功后开始给药,泰必利组给予泰必利混悬液(3.194mg/ml),自拟菖蒲郁金汤高、中、低剂量组分别给予相应浓度(5.152、2.576、1.288g生药/ml)的自拟菖蒲郁金汤药液,均按15ml/(kg·d)灌胃;空白组和模型组给予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续4W。造模完及每周灌胃完1小时后进行运动行为及刻板行为观察。灌胃给药第28天后24小时采集标本,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠纹状体多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)、海马去甲肾上腺素(NE)、脑干5-羟色胺(5-HT)及血浆DA、HVA、NE、5-HT的含量;蛋白免疫印迹(WB)法检测纹状体多巴胺受体D1(DRD1)、多巴胺受体D2(DRD2)、儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)、单胺氧化酶-B(MAO-B)、多巴胺转运体(DAT)蛋白表达;实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)法检测纹状体DRD1、DRD2、COMT、MAO-B m RNA表达;苏木素-伊红染色(HE)法观察纹状体神经细胞变化及免疫组织化学染色(IHC)法检测纹状体DA、DAT蛋白表达。结果:(1)大鼠行为的变化(1)大鼠运动行为的变化造模后,模型组、泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高、中、低剂量组大鼠均出现不同程度的运动行为,但组间比较,运动行为评分差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,治疗2周后,泰必利组大鼠运动行为评分下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗3周后,泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠运动行为评分下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05);治疗4周后,泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠运动行为评分下降,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。(2)大鼠刻板行为的变化造模后,模型组、泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高、中、低剂量组大鼠均出现不同程度的刻板行为,但组间比较,刻板行为评分差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,治疗3周后,自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠刻板行为评分下降,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4周后,泰必利组、自拟菖蒲郁金汤高、中剂量组大鼠刻板行为评分下降,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。(2)大鼠DA及HVA含量的变化与空白组比较,模型组大鼠纹状体DA含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,泰必利组和自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠纹状体DA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05);与空白组比较,模型组大鼠纹状体HVA含量的变化差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠纹状体HVA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血浆DA含量各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠血浆HVA含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,泰必利组和自拟菖蒲郁金汤高、中剂量组大鼠血浆HVA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。(3)大鼠NE和5-HT含量的变化海马NE含量各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠脑干5-HT含量升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠脑干5-HT含量升高,差异有统计学意义(P<0.01)。血浆NE含量各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠血浆5-HT含量的变化差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,自拟菖蒲郁金汤高、中、低剂量组大鼠血浆5-HT含量升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。(4)大鼠纹状体DRD1、DRD2蛋白和m RNA表达的变化与空白组比较,模型组大鼠纹状体DRD1蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,泰必利组和自拟菖蒲郁金汤各剂量组大鼠纹状体DRD1蛋白表达的变化差异无统计学意义(P>0.05);纹状体DRD2蛋白表达各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠纹状体DRD1 m RNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,泰必利组及自拟菖蒲郁金汤各剂量组大鼠纹状体DRD1m RNA表达的变化差异无统计学意义(P>0.05);纹状体DRD2 m RNA表达各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)大鼠纹状体COMT、MAO-B蛋白和m RNA表达的变化大鼠纹状体COMT、MAO-B蛋白表达各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠纹状体COMT、MAO-B m RNA表达各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(6)大鼠纹状体DAT蛋白表达的变化与空白组比较,模型组大鼠纹状体DAT蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,泰必利组和自拟菖蒲郁金汤高剂量组大鼠纹状体DAT蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。(7)大鼠纹状体神经细胞的变化造模后,模型组大鼠纹状体神经细胞(以神经元细胞为主)萎缩;治疗后,泰必利组大鼠纹状体神经细胞无明显变化;自拟菖蒲郁金汤各剂量组大鼠纹状体神经元细胞数量有所增加,体积有所增大,且以高剂量组为最显著。(8)大鼠纹状体DA、DAT免疫染色强度的变化与空白组比较,模型组大鼠纹状体DA和DAT蛋白表达平均光密度降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05);与模型组比较,泰必利组DA和DAT蛋白表达平均光密度升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05);自拟菖蒲郁金汤高剂量组DA和DAT蛋白表达平均光密度升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。结论:(1)自拟菖蒲郁金汤具有抗抽动的作用,其疗效与剂量相关,且其抗抽动作用优于泰必利。(2)单胺类神经递质间的平衡失调可能与TS发病相关,自拟菖蒲郁金汤可能通过调节单胺类神经递质间的平衡而达到抗抽动的作用。(3)在TS的发病过程中,DA系统功能的亢进可能与DR超敏感相关,而自拟菖蒲郁金汤可能通过降低DR的敏感性,从而达到拮抗DA系统功能亢进的作用,最终起到抗抽动的作用。(4)自拟菖蒲郁金汤能够抑制DA系统功能的亢进,与其能增强COMT表达有一定的关系。(5)在TS的发病过程中,DA系统功能的亢进可能与DA能神经纤维的过度支配无关,而自拟菖蒲郁金汤的抗抽动作用可能与其对DAT表达的增强有一定的关系。(6)自拟菖蒲郁金汤能够缓解TS的病情,可能与其对损伤神经细胞的修复作用有关。