巴戟天对大鼠骨髓基质细胞增殖、成骨分化及Cbfα1基因表达的影响

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目的 通过巴戟天水提物、醇提物对体外培养大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)增殖、诱导BMSCs的成骨分化及Cbfα1基因表达影响的研究,建立含巴戟天血清体外培养大鼠BMSCs模型,从分子生物学水平研究巴戟天补肾强筋骨的作用机制。方法 采用含药血清的方法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导剂组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导剂组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导剂组),采用MTT法检测A组、B组、C组不同给药剂量、给药时间、采血时间、血清浓度的含药血清培养大鼠BMSCs 72小时后的OD值,建立含巴戟天水提物、醇提物血清体外培养大鼠BMSCs模型;流式细胞仪检测A组、B组、C组同一血清浓度体外培养大鼠BMSCs 72小时后的G1、S、G2期的DNA含量;采用改良Gomori钙钴法、茜素红染色、Van-Gieson苦味酸-酸性品红法分别观察各组碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节、Ⅰ型胶原染色情况;取各组不同时间点培养液测定碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量以及采用RT-PCR方法进行半定量分析各组不同时间点的Cbfα1基因表达;结果:模型中4天组(给药时间),等剂量组(给药剂量),1小时组(采血时间)的OD值,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),各组培养血清浓度的OD值20%>10%>5%,巴戟天水提物、巴戟天醇提物组S期细胞DNA含量显著高于对照组,20%巴戟天醇提物血清浓度的影响最优。碱性磷酸酶染色、茜素红染色强弱顺序为F组>E组>D组>B组>A组,C组为阴性,Ⅰ型胶原染色强弱顺序为F组>E组>D组>B组>A组>C组,碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A组、B组、D组、E组、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05);E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05)。经典成骨诱导方法诱导至第3天的时间点开始
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