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研究背景：结直肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一，患者经传统治疗5年生存率仍不理想。目前过继性细胞免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗后第四大抗肿瘤治疗手段，在延长患者生存期和改善生活质量方面具有独特的优势。如何进一步增强免疫细胞对肿瘤的特异性杀伤活性，提高整体疗效始终是研究者们关注的重点。机体抗肿瘤免疫主要是T细胞介导的肿瘤特异性免疫，而树突状细胞（dendritic cell, DC）的激活在细胞免疫应答中占据重要地位。国内外最新研究提示，CD40单克隆抗体可以更有效的活化DC。然而，应用CD40单抗激活DC，进一步诱导肿瘤特异性T细胞治疗直肠癌的相关研究在国内外未见报道。研究目的：观察4株新型鼠抗人CD40单克隆抗体与不同细胞的结合率；筛选出与DC高亲和性抗体及最适浓度，以此激活DC进而诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL），观察其对人直肠癌细胞的体内外抗肿瘤作用。研究方法：1）应用流式细胞仪检测不同细胞与4株新型鼠抗人CD40单克隆抗体的亲和性；筛选DC与4株鼠抗人CD40单克隆抗体的最适结合浓度；2）流式细胞仪检测不同条件激活的DC表型及细胞因子分泌情况。3）将常规激活方法和不同株CD40单抗激活的DC与T细胞混合培养，诱导肿瘤特异性CTL产生，同时培养细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer, CIK）作为对照，ELISA法检测各组CTL和CIK共培养上清中IFN-γ的分泌量；并应用LDH释放法检测各组CTL和CIK细胞的体外抗肿瘤活性。4）将SW-620人直肠癌细胞注射至裸鼠腋窝皮下构建裸鼠荷瘤模型。5）将荷瘤裸鼠分组经尾静脉分别注射不同制剂进行治疗：A组生理盐水； B组CD40单抗E11；C组常规方法诱导的CTL；D组E11激活的DC所诱导的CTL（E11-DC-CTL）；E组CD40单抗E11联合E11-DC-CTL。治疗2个疗程后处死小鼠，分析抑瘤效果。研究结果：1）流式细胞仪检测发现人PBMC、DC、B淋巴细胞、巨噬细胞均可与四株鼠抗人CD40单克隆抗体结合，而人T淋巴细胞、BGC-823人胃癌细胞、LS-174T人结肠癌细胞及EVC细胞不能与之结合；人DC在四株单抗浓度为1μg/ml时结合率即可达90%以上，处于饱和状态；2）单抗E11参与激活的DC表面CD80、CD86、CD83及HLA-DR的表达及培养上清中IL-12含量均显著高于对照组及其余三株单抗组；3）效靶比为5:1和10:1时，E11-DC-CTL组8h杀伤率显著优于其余各组；4）裸鼠左侧腋窝皮下瘤模型构建成功，第10天时致瘤率达100%；5）体内抑瘤实验：CTL治疗组抑瘤率显著高于E11单抗注射组，其中E11-CTL和E11+E11-CTL均优于常规CTL组，但两组间抑瘤率差异不显著。研究结论：1）四株鼠抗人CD40单克隆抗体均可与人PBMC、DC、B细胞、巨噬细胞特异性结合，但不与肿瘤细胞和血管内皮细胞结合。2）CD40单抗E11激活DC，可以显著上调DCs表面共刺激分子的表达，并促进DC分泌更多IL-12。3）常规诱导CTL对肿瘤细胞的体外杀伤活性优于CIK细胞，单抗E11激活DC诱导的CTL体外杀伤效应显著高于常规诱导的CTL。4）CD40单抗E11激活DC诱导CTL的体内抑瘤活性亦显著优于常规诱导的CTL；但单纯输注CD40单抗E11无明显抗肿瘤作用，E11-DC-CTL联合CD40单抗E11也无更强抑瘤效果。