苦参碱(Matrine,Mat)是苦参中起治疗作用的有效成分。现代研究证明其有激素样作用而无激素副作用,是治疗皮肤过敏性疾病的有效药物。目前,Mat的透皮给药制剂如水溶液、软膏、水凝胶等均存在药物有效剂量维持时间短、给药次数频繁、透皮效果不佳等缺点,故尝试将其制备为新型透皮给药系统,以获得稳定持久的有效药物浓度,提高其透皮效率和治疗效果。 微乳(Microemulsion,ME)是一种新型的透皮给药载体,能有效增溶药物,形成较高的浓度梯度。疏水部分与角质层相互作用,干扰脂质双分子层结构；亲水部分可水化角质层,其共同作用可增强角质层的透过性,促进药物的透皮吸收。因此,微乳透皮制剂引起了透皮给药载体领域的广泛关注和研究。 本课题制备Mat微乳透皮给药系统,以获得更加持久稳定的血药浓度,更高的生物利用度,增加患者的用药顺应性,提高其临床治疗效果。本研究以体外透皮实验中的药物单位面积累积透皮量Q为考察指标,对Mat微乳透皮给药系统进行处方优化和制备工艺筛选；进行体外制剂学评价；采用SD大鼠卵蛋白被动皮肤致敏模型进行药效学研究;采用昆明种小鼠,对Mat微乳组、Mat水溶液组与Mat静脉注射组进行药动学考察,对其药动学参数进行对比研究。 一、苦参碱体外透皮实验方法的建立 本研究建立了小鼠离体皮肤体外透皮实验方法。采用Valia-Chien扩散池,供给液和接收液置于离体皮肤两边,32±1℃恒温恒速持续搅拌,定时取样并补加等量空白接收液,样品适当处理,HPLC检测。 本研究建立了Mat样品的高效液相色谱定量分析法。色谱柱:Kromosil ODS C18柱(4.6mm×150mm,5μm);紫外检测波长：215nm;流速：1.0mL·min-1;流动相：乙睛-0.2mol·L-1磷酸二氢钾水溶液(0.1％三乙胺)(15:85),药物浓度与峰面积之间具有良好线性关系,精密度、准确度良好,符合分析要求。 二、苦参碱微乳的处方优化和制备工艺筛选 本研究对Mat微乳进行了处方优化。首先,以无毒无刺激性的制剂辅料作为备选组分,以辅料对Mat的促透作用为评价指标,并考察辅料对Mat的溶解能力,确定体系的组成成分。 考察结果,卵磷脂(Lecithin E200)为乳化剂、聚氧乙烯辛基苯基醚(OP)为助乳化剂、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)为油相、去离子水为水相。绘制伪三元相图,Lecithin E200与OP的重量比值为5:5、4:6、3:7时可成乳,3:7时有最大成乳面积,故确定处方中Lecithin E200与OP的重量比值为3:7。于相图上下左右中各取1个处方,进行离体皮肤体外透皮实验,当处方组成为1％Mat、25％LecithinE200/OP(3:7)、12％IPM、62％水时,Mat有最大单位面积累积透皮量Q。对不同处方组成的Mat微乳进行体外评价,实验结果表明,当处方中油相含量增加时,Mat微乳系统粒径变大,zeta电位无显著变化；所有处方组成的Mat微乳,电导率均大于100μS·cm-1,并且当处方中水相含量增加时电导率增加,表明制备得到的Mat微乳为O/W型；透射电镜图片显示,不同处方组成的Mat微乳,粒子外观形态变化不大,均呈类椭圆形。本研究考查了Mat微乳的制备工艺,并对不同制备工艺得到的Mat微乳进行评价。以Mat体外透皮实验中的Q为评价指标,比较了传统的水分滴加法、加大外力做功的超声乳匀法和高压均质法三种制备方法,实验结果表明,三者中最佳制备工艺为高压均质法,既初乳制备温度37℃、均质压力一级阀50bar、二级阀500bar、均质循环次数3次。三种制备工艺得到的微乳外观无差别,均为淡黄色透明液体；粒径大小差别显著,高压均质法制备得到的Mat微乳粒径最小为30 nm左右,超声均质法制备得到的Mat微乳粒径偏大为80nm左右,而传统的手工滴加法制备得到的Mat微乳粒径为120nm左右；不同制备方法对Mat微乳zeta电位无显著影响；透射电镜图片显示,制备方法施加的外力做功增大,微乳的粒子形态更为统一圆整。 本研究对Mat微乳的稳定性进行了初步考察。高速离心实验表明,高速离心30min,其外观未发生变化,无沉降絮凝等不稳定现象。室温避光条件下放置6个月,Mat微乳外观不发生变化,药物含量不下降,各项理化性质参数不发生变化,表明制各得到的Mat微乳稳定性良好。 三、苦参碱微乳的皮肤刺激性和药效学考察 本研究对Mat微乳的皮肤刺激性进行了考察,以生理盐水为对照,新西兰大白兔为实验动物。单次给药后,皮肤无红斑、水肿等刺激性现象发生:多次给药后,皮肤无红斑,但有水肿出现,去除药物后可恢复,表明Mat微乳符合透皮制剂要求。 本部分以SD大鼠同种被动皮肤过敏为模型,采用卵白蛋白为抗原,白百破疫苗为佐剂,对Mat微乳进行药效学研究。通过测定反应蓝斑的吸光度,来评价Mat微乳的药效。结果表明,与Mat水溶液相比,Mat微乳对皮肤过敏有显著的抑制作用,但单次给药效果不如阳性对照地塞米松软膏组。 四、苦参碱微乳的药动学研究 本部分采用昆明种雄性小鼠为试验动物,通过腹部涂抹Mat微乳进行体内药动学研究,在规定的时间点进行眼眶摘除取血,高效液相色谱测定血药浓度,绘制药时曲线,求算药动学参数。同时,采用昆明种小鼠静脉注射Mat生理盐水溶液作为阳性对照组,计算绝对生物利用度。 Mat静注后Cmx为378.11ng·mL-1, MRT为2.82h;Mat微乳组的Tmax为8.17h,Cmax为138.94ng·mL-1,MRT为24.60h;Mat水溶液组的Tmax为12.00h.,Cmax为150.04ng·mL-1,MRT为17.38h。微乳组的Cmax明显降低,说明该微乳制剂具有平稳血药浓度的作用；MRT比静注组和水溶液组显著延长,说明该微乳制剂具有缓释的特点。不扣除微乳和水溶液中的残留药量,分别与注射剂组相比,微乳组的绝对生物利用度为55.89％,水溶液组的绝对生物利用度为40.96％,微乳组的绝对生物利用度显著优于水溶液组。本研究为今后Mat微乳透皮给药系统的研制及中试生产的制备工艺提供了参考依据,该体系具备体外性质稳定,效果显著,延缓给药间隔时间等优点。因此Mat微乳制剂具有良好的临床应用和产品开发前景。