【摘 要】
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目的:复制UVB（20mJ.cm-2）诱导的HaCaT细胞凋亡模型,探究内质网应激和ROS与内质网应激在UVB诱导HaCaT细胞凋亡及级联通路的关系,证明扇贝多肽对该级联通路的调控作用。方法:复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型,透射电镜观察细胞内质网的超微结构变化、RT-PCR、western-blot、小RNA干扰技术检测UVB辐射后内质网应激相关因子 GRP78、GRP94、PERK、AT
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目的:复制UVB（20mJ.cm-2）诱导的HaCaT细胞凋亡模型,探究内质网应激和ROS与内质网应激在UVB诱导HaCaT细胞凋亡及级联通路的关系,证明扇贝多肽对该级联通路的调控作用。方法:复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型,透射电镜观察细胞内质网的超微结构变化、RT-PCR、western-blot、小RNA干扰技术检测UVB辐射后内质网应激相关因子 GRP78、GRP94、PERK、ATF6、IRE-1、p-eIF2α、CHOP、Bcl-2 的时程性变化,明确内质网凋亡级联通路;应用ROS抑制剂NAC和内质网抑制剂4-PBA,分析 ROS 与内质网应激的关系;MTT、Hoeschst 33258、western-blot 检测 NAC、4-PBA和PCF（1.42、2.84、5.69mmol·L-1）预处理后对UVB诱导HaCaT细胞活性、凋亡及内质网相关因子的影响。结果:①UVB辐射诱导内质网应激反应:20mJ.cm-2UVB辐射HaCaT细胞18h细胞凋亡率为39.67%,透射电镜发现UVB照射的HaCaT细胞后内质网扩张伴有脱颗粒现象;RT-PCR和Weatern Blot结果显示0-12h内质网应激反应的两种标志分子GRP78和GRP94的表达增加,并呈时间依赖性;②UVB诱导HaCaT细胞凋亡过程中激活PERK途径:结果显示PERK及其下游分子eIF2a 0-24h蛋白表达自3h开始增加至24h达高峰;③UVB辐射HaCaT细胞通过CHOP表达上调诱发细胞凋亡:20mJ.cm-2UVB能够诱导CHOPmRNA和CHOP蛋白的表达,siRNA抑制CHOP表达时,与正常组相比,UVB模型组Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达明显降低（P<0.01）④MTT结果显示NAC和4-PBA预处理组细胞活性增强,与模型组相比GRP78/CHOP./Bax蛋白表达减少,Bcl-2表达增加（P<0.05）;⑤MTT结果显示PCF预处理组细胞存活率分别为61.23±7.42,82.79±3.21,94.31±2.16明显高于UVB模型组（P<0.05）,且效应呈剂量依赖性;Hoechst 33258荧光染色显示,预处理PCF组凋亡细胞明显减少,与UVB模型组相比差异显著（P<0.01）,PCF预处理组细胞GRP78、CHOP/GADD153、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达明显低于UVB模型组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:UVB经GRP78/PERK/eIF2α/CHOP级联通路引起内质网应激致HaCaT细胞凋亡;ROS是UVB辐射内质网应激的上游因子;PCF可通过调控内质网应激通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡。
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